"SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:1972年11月從一們多次化療及放療的擴(kuò)散性神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株。 該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。 有報(bào)道稱SK-N-BE(2)細(xì)胞的飽和濃度超過(guò)1x106細(xì)胞/平方厘米。細(xì)胞形態(tài)多樣,有的有長(zhǎng)突觸,有的呈上皮細(xì)胞樣。 細(xì)胞會(huì)聚集,形成團(tuán)塊并浮起 H-7721細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TSU-Pr1細(xì)胞、TGBC-11-TKB細(xì)胞、HEp-2細(xì)胞 MKN-28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H820細(xì)胞、Japanese Tissue Culture-39細(xì)胞、HTh 74細(xì)胞 373MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:624 MEL細(xì)胞、ARPE19細(xì)胞、HMEL細(xì)胞 HIEC-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM04679細(xì)胞、SW1573細(xì)胞、RPMI2650細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中相關(guān)問題總結(jié):懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理?一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時(shí),可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度,重復(fù)前述步驟即可。欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動(dòng)物細(xì)胞,其離心速率一般為300xg(約1,000rpm),5-10分鐘,過(guò)高之轉(zhuǎn)速,將造成細(xì)胞死亡;細(xì)胞之接種密度為何?依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因;細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中,必須使用前先行配制完成;DMSO之等級(jí)和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何?冷凍保存使用之DMSO等級(jí),必須為Tissue culture grade之DMSO,其本身即為無(wú)菌狀況,次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于4°C,避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì),并可減少污染之機(jī)會(huì)。若要過(guò)濾DMSO,則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜;冷凍保存細(xì)胞之方法?冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C 30~60分鐘→ (-20°C 30分鐘)→-80°C 16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20°C不可超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;細(xì)胞欲冷凍保存時(shí),細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度?冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x10(6)cells/ml vial,融合瘤細(xì)胞則以5x10(6)cells/ml vial為宜;應(yīng)如何避免細(xì)胞污染?細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無(wú)菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法;如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí),應(yīng)如何處理?直接滅菌后丟棄之。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過(guò)20%,因?yàn)楹窟^(guò)低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足,過(guò)高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購(gòu)買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購(gòu)買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購(gòu)買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 MOLT-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HKBML細(xì)胞、NE1-E6E7細(xì)胞、BEL-7402細(xì)胞 Rat Glomerular Endothelial細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH747細(xì)胞、JeKo-1細(xì)胞、NCI747細(xì)胞 C33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:2B4細(xì)胞、B16-F10--RED細(xì)胞、MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細(xì)胞 Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FU-97細(xì)胞、OCM-1細(xì)胞、WM-451Lu細(xì)胞 GB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 680N細(xì)胞、HL1細(xì)胞、rUCMSCs細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來(lái)要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來(lái)復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬(wàn)不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng),應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^(guò)1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過(guò)這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說(shuō),人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 J774.A1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS114細(xì)胞、UMR 106細(xì)胞、RGC-6細(xì)胞 OCI Ly3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tokyo Medical and Dental university 8細(xì)胞、MDAMB436細(xì)胞、CESS細(xì)胞 H-508細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LLCPK1細(xì)胞、NCIH727細(xì)胞、University of Arizona Cell Culture-812細(xì)胞 HuH28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IHH4細(xì)胞、LS 513細(xì)胞、PTK-2細(xì)胞 NG108-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRAEC細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞、AA-Mel細(xì)胞 P30-OHK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA468細(xì)胞、KU812-F細(xì)胞、H441細(xì)胞 CEM C7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 039細(xì)胞、A2008細(xì)胞、BeWo細(xì)胞 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 HPC-Y5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02131A細(xì)胞、H1694細(xì)胞、IEC 6細(xì)胞 HEL 299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2085細(xì)胞、MM.1S細(xì)胞、L-5178-Y細(xì)胞 Case 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2106細(xì)胞、BGC823細(xì)胞、H1666細(xì)胞 ARO81-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IBRS2細(xì)胞、Bowes melanoma cells細(xì)胞、CoCL2細(xì)胞 SCC154細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Plaepi 34細(xì)胞、VM-CUB1細(xì)胞、BHT101細(xì)胞 COLO 680N細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVG(P12)細(xì)胞、J45.01細(xì)胞、5637細(xì)胞 QGY7701細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U343細(xì)胞、CX1細(xì)胞、AM細(xì)胞 Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-ADR-RES細(xì)胞、SKN-AS細(xì)胞、A-375.S2細(xì)胞 H-647細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit225/K6細(xì)胞、P3X63 AG 8.653細(xì)胞、NRK49F細(xì)胞 Mc Coy細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHs74 Int細(xì)胞、526細(xì)胞、KASUMI1細(xì)胞 L-M[TK-]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL 5細(xì)胞、H2286細(xì)胞、C57 Mouse Tumor 93細(xì)胞 GM04154B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CG-4細(xì)胞、HCV-29細(xì)胞、SNU-354細(xì)胞 CW2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Epstein-Barr-2細(xì)胞、MJ細(xì)胞、HS 683T細(xì)胞 L 132細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 8226細(xì)胞、MES-13細(xì)胞、H1694細(xì)胞 PC14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LMTK-細(xì)胞、Sup T-1細(xì)胞、HOPC細(xì)胞 MUTZ-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKM1細(xì)胞、HEK293-EBNA細(xì)胞、HIT-T15細(xì)胞 Tokyo Medical and Dental university 8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEK細(xì)胞、HB 611細(xì)胞、FLC-7細(xì)胞 H1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-CA 432細(xì)胞、KCL22S細(xì)胞、YAC細(xì)胞 CNE-2Z細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-27細(xì)胞、WM35細(xì)胞、Line 870 Emory University-4細(xì)胞 MBMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CNLMG-B5537SKIN細(xì)胞、alphaTC1 Clone 6細(xì)胞、UPCI:SCC90細(xì)胞 SK-MEL-24細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HL 60細(xì)胞、EM-3細(xì)胞、NuTu 19細(xì)胞 MLOY4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC615.3細(xì)胞、GM346細(xì)胞、GM00346細(xì)胞 C 643細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 01細(xì)胞、HTh74細(xì)胞、MDA-453細(xì)胞 MBVP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-16細(xì)胞、Human Corneal Endothelial Cells-12細(xì)胞、SK-N-DZ細(xì)胞 MUM2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EL4細(xì)胞、H-187細(xì)胞、KP-N-RT-BM-1細(xì)胞 HNSC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCASMC細(xì)胞、MDAMB435S細(xì)胞、HEL細(xì)胞 SK-CO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1734細(xì)胞、NCI-H1437細(xì)胞、CV 1細(xì)胞 GM03569細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA NPA-87-1細(xì)胞、NCIH3255細(xì)胞、BV2細(xì)胞 Centre Antoine Lacassagne-51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LWnt-3A細(xì)胞、HT 1197.T細(xì)胞、SRA01/04細(xì)胞 KYSE50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HMVEC細(xì)胞、OCI-Ly10細(xì)胞、EJ-1細(xì)胞 NL-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RERF-LC-MS細(xì)胞、9L細(xì)胞、Hs832.Tc細(xì)胞 P3-X63-Ag8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo-678細(xì)胞、Sp2/mIL-6細(xì)胞、HEY A8細(xì)胞 MFD-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAPC-4細(xì)胞、JHH-7細(xì)胞、MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞 MDA-MB-134VI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML3細(xì)胞、LM-TK-細(xì)胞、NCI-H2087細(xì)胞 PL-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PA1細(xì)胞、RINm-5F細(xì)胞、B 95.8細(xì)胞 H1155細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HM細(xì)胞、C32 [Human melanoma]細(xì)胞、NCIH526細(xì)胞 LCMS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KRC-Y細(xì)胞、Tj-905細(xì)胞、CT-26細(xì)胞 NPC-TW039細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madison lung細(xì)胞、HCC-1954細(xì)胞、Ramos (RA)細(xì)胞 P3X63-Ag8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:8226/S細(xì)胞、PC14細(xì)胞、OV3121細(xì)胞 MCF7ADR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-5細(xì)胞、A549ATCC細(xì)胞、BrCL12細(xì)胞 Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-251細(xì)胞、CCC-HEL-1細(xì)胞、RERF-LC-MS細(xì)胞 MDA-MB-436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF/CEM/0細(xì)胞、MRASMC細(xì)胞、SCC090細(xì)胞 IAR-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM1細(xì)胞、VA-ES-BJ細(xì)胞、BE(2)-M17細(xì)胞 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系 NCI-H596細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK supertube細(xì)胞、Vero C1008細(xì)胞、Los Angeles Prostate Cancer-4細(xì)胞 H841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 F1細(xì)胞、MonoMac1細(xì)胞、TE-671細(xì)胞 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