"Huh-7 Cell:人肝癌細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:詳見相關文獻介紹 rRMECs細胞系相關產品:NEC-8細胞、751-NA細胞、U 937細胞 P31-FUJ細胞系相關產品:801-D細胞、HCT 15細胞、SL-29細胞 KYSE 70細胞系相關產品:REC細胞、Pt-K1細胞、Kit225-K6細胞 LNCaP.FGC細胞系相關產品:NB-19細胞、B10BR細胞、SW-1417細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 Huh-7 Cell:人肝癌細胞系 如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內,培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關于培養(yǎng)瓶內加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現生長速度快的細胞在玻璃瓶內生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內的生長狀態(tài)也比內好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。 細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結:1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當地溫度,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系 DoHH2細胞系相關產品:VMRCRCZ細胞、KYSE 180細胞、H-2291細胞 Namalwa細胞系相關產品:A 253細胞、CV-1 in Origin Simian-7細胞、Mc Ardle 7777細胞 SNU449細胞系相關產品:BNL 1MEA.7R.1細胞、NCI-H1975細胞、HUC-1細胞 OVCAR.4細胞系相關產品:CCRF/CEM細胞、BeWo細胞、MDCC MSB1細胞 COLO 824細胞系相關產品:KY-270細胞、NP-69細胞、HEK293-EBNA細胞 細胞生長特性:貼壁生長 Huh-7 Cell:人肝癌細胞系 細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結1:復蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y2:首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,表現為先貼后死,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 細胞形態(tài)特性:上皮樣 NCIH1975細胞系相關產品:SW 480細胞、Tb 1 Lu細胞、ME-1 [Human leukemia]細胞 SNU-216細胞系相關產品:MHCC97-L細胞、JVM-3細胞、M-NFS-60細胞 Hs840_T細胞系相關產品:LIXC002細胞、578T細胞、EoL-1 cell細胞 CA 46細胞系相關產品:D283 Med細胞、WERI-Rb 1細胞、Colo741細胞 Mouse Podocyte Clone-5細胞系相關產品:DSL-6A/C1細胞、HCEC-12細胞、U-251細胞 H-3255細胞系相關產品:HT 1080細胞、RL95細胞、B16-F10--RED細胞 C-26細胞系相關產品:NCI-SNU-878細胞、NS-1-Ag4-1細胞、J-774A.1細胞 Huh-7 Cell:人肝癌細胞系 NCIH2286細胞系相關產品:IHH-4細胞、Roswell Park Memorial Institute 8402細胞、HCT/Taxo1細胞 NT2-D1細胞系相關產品:Lewis Lung細胞、SK-MES細胞、A253細胞 SNU-387細胞系相關產品:H-1395細胞、NCIH1105細胞、UMNSAH/DF#1細胞 P3X63-Ag8.653細胞系相關產品:8226/S細胞、PC14細胞、OV3121細胞 H-1975細胞系相關產品:SK-MEL-28細胞、U-343-MG細胞、PT67細胞 MOLT 3細胞系相關產品:BC-009細胞、OAW-42細胞、LA-4 [Mouse lung adenoma]細胞 Kit225-K6細胞系相關產品:NCI-H358細胞、Okayama University Medical School-27細胞、HeLa.S3細胞 Onda 11細胞系相關產品:SK-N-BE(2)C細胞、GM02219D細胞、COLO206細胞 HS 1.Tes細胞系相關產品:MCFs細胞、NCI-747細胞、NCI-H-69細胞 HS 1.Tes細胞系相關產品:MCFs細胞、NCI-747細胞、NCI-H-69細胞 FUOV1細胞系相關產品:COLO320 DM細胞、MonoMac 6細胞、MNNGHOS細胞 NPC-039細胞系相關產品:MCF 7B細胞、PE/CA-PJ-34細胞、Sp2/O-Ag14細胞 SF 539細胞系相關產品:SNU739細胞、HTR-8/SV-neo細胞、NH6細胞 Hs739T細胞系相關產品:OCI-Ly 7細胞、B-cell with DC Morphology細胞、H-2171細胞 Y3Ag1.2.3細胞系相關產品:SKLMS1細胞、SNU16細胞、MDA MB 361細胞 B16細胞系相關產品:Panc-08.13細胞、CCD33Co細胞、Panc-8_13細胞 RGB細胞系相關產品:RL細胞、LTEP a2細胞、SK-MES細胞 Jurkat-FHCRC細胞系相關產品:SNK-1細胞、SKLMS1細胞、H-508細胞 HEC1B細胞系相關產品:PTK 2細胞、MIMVEC細胞、OE-21細胞 GM02131A細胞系相關產品:B16/F10細胞、PLC-8024細胞、MDA MB 453細胞 EVSA/T細胞系相關產品:OCI/AML-5細胞、NCI-H196細胞、A9細胞 IPLB-SF-21細胞系相關產品:Z-138細胞、COLO320 DM細胞、786O細胞 OCI-Ly3細胞系相關產品:C8166細胞、WERI-Rb-1細胞、PLA801D細胞 Hs-27細胞系相關產品:SKNBE2細胞、NTERA2-D1細胞、SNU5細胞 HT 29細胞系相關產品:TM4細胞、G361-mel細胞、SRA01/04 (HLE)細胞 3T3 L1細胞系相關產品:NL20SV細胞、IEC6細胞、NALM 6細胞 OVCAR-8細胞系相關產品:578T細胞、Epstein-Barr-1細胞、BJA-B1細胞 D-407細胞系相關產品:HTR-8細胞、138 MG細胞、SNU1040細胞 RH7777細胞系相關產品:KALS-1細胞、HCC-827細胞、NCI-128細胞 DoHH2細胞系相關產品:VMRCRCZ細胞、KYSE 180細胞、H-2291細胞 H-1930細胞系相關產品:PaCa2細胞、HS-294-T細胞、253J-BV細胞 MLE-12細胞系相關產品:MDA361細胞、Sp 2817細胞、TMK1細胞 C2A細胞系相關產品:HaCaT細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-435細胞、Hs445細胞 A375.S2細胞系相關產品:DMS-153細胞、NH6細胞、NOZAWA細胞 Y3.AG.1.2.3細胞系相關產品:Rat Fetal Lung-6細胞、MES-SA/Dx5細胞、TALL 1細胞 NHRF細胞系相關產品:D-341 Med細胞、MB 157細胞、IOSE 29細胞 MDA468細胞系相關產品:QSG-7701細胞、FHs74Int細胞、HFSF細胞 H-847細胞系相關產品:Li-7細胞、ATDC-5細胞、CMECs細胞 SF 767細胞系相關產品:TSUpr1細胞、ESC細胞、PE/CA-PJ-34細胞 CCRF/CEM-C7細胞系相關產品:SLMT-1細胞、COLO206細胞、SCCVII/St細胞 Saos2細胞系相關產品:BHK21細胞、CL MC/9細胞、RH-30細胞 TOV21細胞系相關產品:H-1563細胞、MDA-231細胞、OCI-Ly18細胞 T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細胞系相關產品:Hs 766細胞、H-676細胞、RPVSMC細胞 Huh-7 Cell:人肝癌細胞系 SHP77細胞系相關產品:HS-683細胞、PFSK細胞、TE-10細胞 NCIH2122細胞系相關產品:LN-382細胞、OVTOKO細胞、NCIH1581細胞 SKRC 39細胞系相關產品:JM1細胞、HOCF細胞、NCI H69細胞 3T6細胞系相關產品:L cells細胞、alpha TC1-6細胞、OV 1063細胞 Plaepi 34細胞系相關產品:MDA PCa 2b細胞、NBL_S細胞、CA922細胞 Calu 3細胞系相關產品:MV-1-Lu細胞、SW780細胞、RT4-D6-P2T細胞 U-266 AR1細胞系相關產品:DI TNC1細胞、SU86.86細胞、H1819細胞 HCC15細胞系相關產品:FRO81-2細胞、YD-38細胞、MOLT.4細胞 Roswell Park Memorial Institute 2650細胞系相關產品:LPC-H12細胞、NCI-H1417細胞、Duke University 145細胞 SSP-25細胞系相關產品:NIH 3T3細胞、MDCK細胞、MCF10-A細胞 Doubling time: ~50 hours (ATCC).細胞系相關產品:OV1/P細胞、HFL細胞、RBSMC細胞 NTERA2D1細胞系相關產品:MARC145細胞、OVCA 432細胞、NCI-H1092細胞 "
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