SURE(Stop Unwanted Rearrangement Events)感受態(tài)細胞是設(shè)計用來克隆在傳統(tǒng)菌株中無法克隆的DNA片段序列的菌株。SURE感受態(tài)菌株缺乏催化重組和刪除非標準二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu), 例如十字形(由反向重復(fù)序列導(dǎo)致)和Z字形的DNA序列的組件。這些非標準二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)在真核細胞中經(jīng)常出現(xiàn),而且這些結(jié)構(gòu)能夠阻礙真核細胞DNA 在傳統(tǒng)菌株中的克隆。sure感受態(tài)細胞是限制性內(nèi)切酶陰性的(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-),核酸內(nèi)切酶(endA)缺陷,和重組酶(recB recJ)缺陷的。同時sure感受態(tài)細胞中所具有的F´ 游離基因上面的lacIqZΔM15基因,使得能夠利用藍白斑進行克隆篩選。
SURE感受態(tài)細胞主要是用來克隆不穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu), 大腸桿菌DNA修復(fù)系統(tǒng)會針對重復(fù)序列、二級結(jié)構(gòu)(如Z-DNA)等真核DNA進行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細胞針對uvrC,umuC,SbcC 和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進行突變,提高了真核來源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達20倍以上,并且適合克隆甲基化DNA。
本身具有Kana和Tet抗性。當轉(zhuǎn)化氯霉素抗性質(zhì)粒到sure感受態(tài)細胞中時,一定要用100 ug/ml的氯霉素平板去篩選。因為sure感受態(tài)細胞在40ug/ul的氯霉素條件下具有抗性,而對于100ug/ul的氯霉素抗生素具有敏感性。
sure感受態(tài)細胞可以用于藍白斑篩選,具有l(wèi)az互補基因。
在載體構(gòu)建過程中,我們經(jīng)常會遇到一些基因片段具有高度的重復(fù),這導(dǎo)致插入載體中的序列可能會在細菌擴增中不穩(wěn)定,在質(zhì)粒擴增中產(chǎn)生形成片段的缺失和重排,如發(fā)現(xiàn)插入片段高頻率地產(chǎn)生缺失和重排,可以嘗試使用重組缺陷大腸桿菌菌株,例如sure感受態(tài)細胞。
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