人β神經(jīng)生長因子（NGF-β）酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱 Human NGF-β ELISA KIT
中文名稱 人β神經(jīng)生長因子（NGF-β）酶聯(lián)免疫試劑盒
別    名 NGF, Beta-HSAN5, NGFB, nerve growth factor  
保存條件 Store at 4°C for 6 months, at -20°C for 12 months. Avoid multiple freeze-thaw cycles (Shipped with wet ice.)
產(chǎn)品介紹 Nerve growth factor (NGF) is a neurotrophic factor and neuropeptide primarily involved in the regulation of growth, maintenance, proliferation, and survival of certain target neurons. It is perhaps the prototypical growth factor, in that it was one of the first to be described. Since it was first isolated by Nobel Laureates Rita Levi-Montalcini and Stanley Cohen in 1956, numerous biological processes involving NGF have been identified, two of them being the survival of pancreatic beta cells and the regulation of the immune system. NGF is initially in a 7S, 130-kDa complex of 3 proteins - Alpha-NGF, Beta-NGF, and Gamma-NGF (2:1:2 ratio) when expressed. This form of NGF is also referred to as proNGF (NGF precursor). The gamma subunit of this complex acts as a serine protease, and cleaves the N-terminal of the beta subunit, thereby activating the protein into functional NGF.The term nerve growth factor usually refers to the 2.5S, 26-kDa beta subunit of the protein, the only component of the 7S NGF complex that is biologically active (i.e. acting as signaling molecules). As its name suggests, NGF is involved primarily in the growth, as well as the maintenance, proliferation, and survival of nerve cells (neurons). In fact, NGF is critical for the survival and maintenance of sympathetic and sensory neurons, as they undergo apoptosis in its absence.[3] However, several recent studies suggest that NGF is also involved in pathways besides those regulating the life cycle of neurons. Nerve growth factor prevents or reduces neuronal degeneration in animal models of neurodegenerative diseases and these encouraging results in animals have led to several clinical trials in humans.NGF promotes peripheral nerve regeneration in rats.The expression of NGF is increased in inflammatory diseases where it suppresses inflammation.NGF appears to promote myelin repair.Hence NGF may be useful for the treatment of multiple sclerosis.[24] NGF could also be involved in various psychiatric disorders, such as dementia, depression, schizophrenia, autism, Rett syndrome, anorexia nervosa, and bulimia nervosa.

Important Note:
This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

神經(jīng)生長因子 nerve growth factor 略稱NGF。在將小鼠肉瘤180移植于3日齡雞胚體壁時(shí)，與移植片連接的脊髓感覺神經(jīng)節(jié)及交感神經(jīng)節(jié)增大20%—40%，基于比克爾（E.D.Bueker，1948）的這一發(fā)現(xiàn)，斯坦利·科恩（Stanley Cohen，1954）等從小鼠肉瘤180和37中成功地分離出具有同一活性的核蛋白質(zhì)，以后從蛇毒中分離出具有千倍活性（Cohen，R.Levi-Montalcini，1956）和從小鼠顎下腺分離出具有萬倍活性的蛋白質(zhì)（Cohen，1960），這種蛋白質(zhì)被稱為神經(jīng)生長因子?？贫鞯日J(rèn)為，其有效成分是分子量約為2.2萬的蛋白質(zhì)，由兩個(gè)亞單位構(gòu)成的二合體或多合體顯有活性。另一方面，瓦恩（S.Varon，1967）認(rèn)為，活性成分是分子量約為14萬的蛋白質(zhì)，具有分子量約為3萬的α、β、γ三種亞單位，僅β表現(xiàn)有NGF活性。將精制的NGF注射于雞胚或初生小鼠，則發(fā)育中的感覺和交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的有絲分裂頻率增高，細(xì)胞數(shù)增加，神經(jīng)節(jié)體積顯著增大。將兔的NGF抗血清注射于懷孕小鼠或初生小鼠等哺乳類，則生出來的幼體及實(shí)驗(yàn)個(gè)體的交感神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)選擇性的壞死（免疫去交感）。對于培養(yǎng)中的神經(jīng)節(jié)，其促進(jìn)纖維生長和再生效果也是顯著的，例如對7日齡的雞胚分離的感覺神經(jīng)節(jié)的培養(yǎng)，若向培養(yǎng)液中加NGF（0.01毫克/毫升），則在24小時(shí)內(nèi)在神經(jīng)節(jié)周圍即可見到神經(jīng)纖維呈旺盛的放射狀伸長（暈圈效應(yīng)），這種現(xiàn)象可被用于鑒定NGF的效果。NGF含于馬、豬的顎下腺和小鼠肉瘤、小鼠胚胎及成體的交感神經(jīng)細(xì)胞、小鼠尿和唾液、雞胚的多種器官和一切哺乳類的血清中。 神經(jīng)生長因子（NGF）是神經(jīng)營養(yǎng)因子中最早被發(fā)現(xiàn)，目前研究最為透徹的，具有神經(jīng)元營養(yǎng)和促突起生長雙重生物學(xué)功能的一種神經(jīng)細(xì)胞生長調(diào)節(jié)因子，它對中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長、再生和功能特性的表達(dá)均具有重要的調(diào)控作用。NGF包含α、β、γ三個(gè)亞單位，活性區(qū)是β亞單位， 由兩個(gè)118個(gè)氨基酸組成的單鏈通過非共價(jià)鍵結(jié)合而成的二聚體，與人體NGF的結(jié)構(gòu)具有高度的同源性，生物效應(yīng)也無明顯的種間特異性。

方法：雙抗夾心法

保質(zhì)期：12個(gè)月

測定長度： 1-4.5小時(shí) 1-3.5小時(shí)

優(yōu)點(diǎn)：

有競爭力的價(jià)格。             預(yù)稀釋的檢測試劑A和B

高靈敏度。                   減少進(jìn)行測試時(shí)的步驟數(shù)

高穩(wěn)定性。                   所有試劑均可在4℃下保存

保質(zhì)期12個(gè)月。              與其他品牌相比反應(yīng)更快

                             保質(zhì)期12個(gè)月

包裝描述：

測定步驟總結(jié)

1.準(zhǔn)備所有試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品；

2.向每個(gè)孔中添加100µL標(biāo)準(zhǔn)液或樣品。在37℃下孵育2小時(shí)；

3.吸出并加入100µL準(zhǔn)備好的檢測試劑A。在37℃孵育1小時(shí)；

4.吸凈并清洗3次；

5.加入100µL制備的檢測試劑B。在37℃孵育1小時(shí)；

6.吸氣并清洗5次；

7.添加90µL底物溶液。在37℃下孵育15-25分鐘；

8.添加50µL終止液。立即在450nm處讀取。

需自備的設(shè)備及試劑

450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)

單道或多道微量加液器及吸頭

稀釋樣品的EP管

蒸餾水或去離子水

吸水紙

盛放洗液的容器

試劑盒的儲(chǔ)存及有效期

未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

穩(wěn)定性

經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。

注意：

試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在首次實(shí)驗(yàn)后 1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題分析

ELISA實(shí)驗(yàn)因靈敏度高，特異性強(qiáng)在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可，但對初學(xué)者而言，如不注意實(shí)驗(yàn)操作過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)，可能會(huì)對最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響，比如實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板，顯色弱靈敏度低，花板無梯度背景高等現(xiàn)象。下面對以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行一一解析。

1.白板現(xiàn)象

在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中所有孔的顏色均為無色，即無信號呈現(xiàn)。

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：

a.試劑已過保質(zhì)期，不同批次稀釋液交叉使用。

b.錯(cuò)加漏加檢測A，檢測B或者底物溶液TMB。

c.洗板或者加樣過程中，酶標(biāo)記物被污染失活，稀釋液中含有酶抑制劑如疊氮吶等。

d.配置稀釋液的蒸餾水可能被污染。

e.洗滌液是濃縮型的，沒有按比例進(jìn)行稀釋。

f.酶標(biāo)記物的活性和效價(jià)比較低。

g.溶液的PH值不正確，一般稀釋液的PH值應(yīng)保持在7.2-7.4。

2.顯色弱靈敏度低

在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中孔的顯色比較淺，即只有微弱的信號呈現(xiàn)。

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：

a.產(chǎn)品過有效期，試劑沒有按規(guī)定進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４妗?/p>

b.試劑，標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品在使用前沒有平衡到室溫。

c.少加了試劑的量或者加入試劑的稀釋比例不當(dāng)。

d.洗板或者加樣過程中，酶標(biāo)物受污染失活。

e.孵育時(shí)間和孵育溫度未達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

f.洗滌液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗板次數(shù)過多，洗板沖擊力過大，洗板浸泡時(shí)間過長。

g.底物溶液TMB顯色時(shí)間太短。

3.花板無梯度背景高

在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中的孔有顏色但沒有梯度，背景也可能較高.

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：

a.底物溶液TMB未置于陰涼避光處保存，實(shí)驗(yàn)前溶液已經(jīng)變藍(lán)。

b.孵育溫度過高或者孵育時(shí)間過長，發(fā)生了較強(qiáng)的非特異性吸附。

c.沒有按說明書要求洗板，特別是洗板時(shí)洗滌液的量少加了。

d.加樣時(shí)沒有換槍頭造成交叉污染。

e.花板現(xiàn)象：低濃度或者低活性的包被抗體或者檢測抗體，封閉不足導(dǎo)致的本底不穩(wěn)定，洗板不充分，包被板子的問題。

綜上所述：在ELISA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下問題：

1.在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該按相關(guān)要求將實(shí)驗(yàn)試劑平衡至室溫。

2.包被抗體和檢測抗體應(yīng)該是有高活性的且都針對同一抗原。

3.試劑保存：蛋白抗體類試劑保存于-20攝氏度，顯色液洗滌液保存于2-8攝氏度。

4.各試劑在使用前應(yīng)充分混勻，以保證試劑的均一性和準(zhǔn)確性。

5.嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑。

6.洗板次數(shù)，洗板液的量，洗板液浸泡時(shí)間的長短，洗板的力度都是應(yīng)該注意的問題。

7.相關(guān)濃縮液應(yīng)按要求稀釋到相應(yīng)比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之間。

8.在終止反應(yīng)時(shí)盡量避免微孔中存有氣泡。

9.終止反應(yīng)完成后應(yīng)該在2min內(nèi)完成酶標(biāo)儀讀數(shù)。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！