pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)
pCMV-N-EGFP是信裕生物自行研發(fā)的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增強(qiáng)綠色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個EGFP的完整編碼序列，因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有EGFP標(biāo)簽的融合蛋白。利用EGFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位，也可以利用EGFP抗體來檢測或免疫沉淀融合蛋白。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可以使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。
pCMV-N-EGFP質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
Multiple cloning site
1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site
1503-1524
SV40 polyA signal
1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication
2057-2363
Neomycin/kanamycin resistance ORF
205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3697-4155
pCMV-N-EGFP質(zhì)粒(5003bp)的圖譜如下：
pCMV-Blank的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
651
GAGCTCTAGC
GCTACCGGTC
TGAGCAAGGG
CTCGAGATCG
CGATGGCCAG
ACTCGTTCCC
701
TTCACCGGGG
TGGTGCCCAT
CCTGGTCGAG
CTGGACGGCG
AAGTGGCCCC
ACCACGGGTA
GGACCAGCTC
GACCTGCCGC
751
CCACAAGTTC
AGCGTGTCCG
GCGAGGGCGA
GGGCGATGCC
GGTGTTCAAG
TCGCACAGGC
CGCTCCCGCT
CCCGCTACGG
801
AGCTGACCCT
GAAGTTCATC
TGCACCACCG
GCAAGCTGCC
TCGACTGGGA
CTTCAAGTAG
ACGTGGTGGC
CGTTCGACGG
851
CCCACCCTCG
TGACCACCCT
GACCTACGGC
GTGCAGTGCT
GGGTGGGAGC
ACTGGTGGGA
CTGGATGCCG
CACGTCACGA
901
CCCCGACCAC
ATGAAGCAGC
ACGACTTCTT
CAAGTCCGCC
GGGGCTGGTG
TACTTCGTCG
TGCTGAAGAA
GTTCAGGCGG
951
GCTACGTCCA
GGAGCGCACC
ATCTTCTTCA
AGGACGACGG
CGATGCAGGT
CCTCGCGTGG
TAGAAGAAGT
TCCTGCTGCC
1001
ACCCGCGCCG
AGGTGAAGTT
CGAGGGCGAC
ACCCTGGTGA
TGGGCGCGGC
TCCACTTCAA
GCTCCCGCTG
TGGGACCACT
1051
GCTGAAGGGC
ATCGACTTCA
AGGAGGACGG
CAACATCCTG
CGACTTCCCG
TAGCTGAAGT
TCCTCCTGCC
GTTGTAGGAC
1101
TGGAGTACAA
CTACAACAGC
CACAACGTCT
ATATCATGGC
ACCTCATGTT
GATGTTGTCG
GTGTTGCAGA
TATAGTACCG
1151
AAGAACGGCA
TCAAGGTGAA
CTTCAAGATC
CGCCACAACA
TTCTTGCCGT
AGTTCCACTT
GAAGTTCTAG
GCGGTGTTGT
1201
CAGCGTGCAG
CTCGCCGACC
ACTACCAGCA
GAACACCCCC
GTCGCACGTC
GAGCGGCTGG
TGATGGTCGT
CTTGTGGGGG
1251
GCCCCGTGCT
GCTGCCCGAC
AACCACTACC
TGAGCACCCA
CGGGGCACGA
CGACGGGCTG
TTGGTGATGG
ACTCGTGGGT
1301
AGCAAAGACC
CCAACGAGAA
GCGCGATCAC
ATGGTCCTGC
TCGTTTCTGG
GGTTGCTCTT
CGCGCTAGTG
TACCAGGACG
1351
GACCGCCGCC
GGGATCACTC
TCGGCATGGA
CGAGCTGTAC
CTGGCGGCGG
CCCTAGTGAG
AGCCGTACCT
GCTCGACATG
PstIEcoRIEcoRV SalIBglII XhoIXbaISpeI
1401
AGCTTCTGCA
GGAATTCGAT
ATCGTCGACA
GATCTCTCGA
GTCTAGAACT
TCGAAGACGT
CCTTAAGCTA
TAGCAGCTGT
CTAGAGAGCT
CAGATCTTGA
1451
AGTGGGCCCG
GTACCTTAAT
TAATTAAGGT
ACC
TCACCCGGGC
CATGGAATTA
ATTAATTCCA
TGG
pCMV-N-EGFP中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括：
AclI
AflII
AhdI
AscI
AsiSI
BaeI
BbsI
BbvCI
BlpI
BmgBI
BsiWI
BsmBI
BspEI
BspQI
BssHII
BstEII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
FseI
NotI
NruI
PflMI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspXI
SacII
SapI
SbfI
ScaI
SgrAI
SmaI
SwaI
TspMI
XcmI
XmaI
XmnI
pCMV-Blank中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pCMV-Blank once)包括：
NdeI
CA`TA,TG
240
ApaI
G,GGCC`C
1454
SnaBI
TAC|GTA
346
PvuI
CG,AT`CG
1534
CspCI
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
380
BclI
T`GATC,A
1690
NheI
G`CTAG,C
597
MfeI
C`AATT,G
1783
BmtI
G,CTAG`C
597
HpaI
GTT|AAC
1796
Eco53kI
GAG|CTC
653
MluI
A`CGCG,T
1919
SacI
G,AGCT`C
651
BsaXI
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
2080
AfeI
AGC|GCT
660
DraIII
CAC,NNN`GTG
2146
AgeI
A`CCGG,T
664
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
2805
BcgI
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
765
StuI
AGG|CCT
2854
BsrGI
T`GTAC,A
1386
ClaI
AT`CG,AT
2873
BamHI
G`GATC,C
1394
BspDI
AT`CG,AT
2873
HindIII
A`AGCT,T
1400
EagI
C`GGCC,G
2939
PstI
C,TGCA`G
1406
KasI
G`GCGC,C
3032
EcoRI
G`AATT,C
1412
NarI
GG`CG,CC
3033
EcoRV
GAT|ATC
1420
SfoI
GGC|GCC
3034
SalI
G`TCGA,C
1424
PluTI
G,GCGC`C
3032
AccI
GT`MK,AC
1425
MscI
TGG|CCA
3115
BglII
A`GATC,T
1430
PflFI
GACN`N,NGTC
3151
BsoBI
C`YCGR,G
1436
Tth111I
GACN`N,NGTC
3151
PaeR7I
C`TCGA,G
1436
BsrDI
GCAATG,NN`
3264
AvaI
C`YCGR,G
1436
RsrII
CG`GWC,CG
3549
XhoI
C`TCGA,G
1436
BstBI
TT`CG,AA
3715
XbaI
T`CTAG,A
1442
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
4022
SpeI
A`CTAG,T
1448
ApaLI
G`TGCA,C
4637
PspOMI
G`GGCC,C
1454
PciI
A`CATG,T
4951
pCMV-N-EGFP質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
pCMV-N-EGFP的全序列信息：D2707 pCMV-N-EGFP-seq.txt
pCMV-N-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果請參考圖1。
圖1. pCMV-N-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果圖。左側(cè)為明場照片，右側(cè)為熒光照片。
包裝清單：
KL-2707-1μg
pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)
1μg
KL-2707-100μg
pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)
100μg
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)信裕生物書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)說明書；pCMV-N-EGFP (綠色熒光蛋白)廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品。總部位于上海，并在北京、廣東，江西，吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。