Trizol (總RNA抽提試劑)

信裕生物生產(chǎn)的Trizol是一種用于細(xì)胞或組織總RNA抽提的試劑。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步驟完全相同。
Trizol的顏色和TRIzol相同，加入氯仿后上層呈無(wú)色，下層呈紫紅色，便于吸取上層水相。
Trizol對(duì)動(dòng)植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提均適用。
Trizol可以抽提長(zhǎng)達(dá)15 kb的RNA，也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA時(shí)宜-70℃沉淀過(guò)夜。
Trizol抽提所得RNA無(wú)DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0。
裂解細(xì)胞或和組織共勻漿時(shí)，Trizol可以保持樣品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。
每一百萬(wàn)細(xì)胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用Trizol抽提可得1-10μg RNA。產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異。
抽提兩個(gè)樣品約需一小時(shí)。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern，點(diǎn)雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protection assay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表達(dá)芯片分析、高通量測(cè)序(deep sequencing)等對(duì)RNA質(zhì)量要求較高的情況。
信裕生物生產(chǎn)的Beyozol(R0011)和Trizol(R0016)的成分有細(xì)微差別，實(shí)際抽提效果無(wú)任何顯著差異。
每100ml Trizol可以抽提100個(gè)六孔板中的樣品或100個(gè)50-80mg的組織樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)： 
需自備氯仿，異丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。DEPC(ST036)，DEPC水(R0021)可向信裕生物訂購(gòu)。
所有離心管，槍頭及相關(guān)溶液都必須無(wú)RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過(guò)夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或Milli-Q級(jí)水中，處理過(guò)夜，滅菌即成DEPC水。
使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過(guò)程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會(huì)被釋放出來(lái)并剪切樣品。如果不能及時(shí)抽提RNA，推薦先加入適量Trizol，并裂解樣品后凍存。
必須戴一次性手套操作，且盡量不要對(duì)著RNA樣品呼氣或說(shuō)話(huà)，以防RNA酶污染。建議戴一次性口罩操作。
Trizol含有毒物質(zhì)苯酚，避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請(qǐng)戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。如皮膚接觸Trizol，請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請(qǐng)聽(tīng)取醫(yī)生意見(jiàn)。
Trizol抽提總RNA的同時(shí)，理論上也可抽提蛋白和DNA，但未經(jīng)測(cè)試。有興趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步驟進(jìn)行操作。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. 細(xì)胞裂解或組織勻漿。
a. 貼壁細(xì)胞
吸盡培養(yǎng)液，每10平方厘米細(xì)胞加入1ml Trizol。一般六孔板每孔加1ml Trizol，12孔板每孔加0.5ml Trizol。晃動(dòng)3-5下，再用槍吹打2-3下，確保全部裂解，然后吸至離心管中。
b. 懸浮細(xì)胞
離心收集細(xì)胞，吸盡液體，每五百萬(wàn)至一千萬(wàn)動(dòng)植物或酵母細(xì)胞，或一千萬(wàn)細(xì)菌，加入1ml Trizol。用槍吹打或適當(dāng)vortex，確保全部裂解。某些酵母和細(xì)菌如裂解不充分，可用勻漿器勻漿，確保全部裂解。
c. 組織
先將組織剪切成小塊，放入普通玻璃勻漿器內(nèi)。每50mg-80mg組織加入1ml Trizol，勻漿。對(duì)于RNA完整性要求比較高的情況，推薦先液氮冷凍組織塊，然后在低溫下用研缽研碎組織，隨后再加入Trizol進(jìn)行總RNA抽提。
2. 對(duì)于某些蛋白，多糖或脂含量很高的細(xì)胞或組織，Trizol裂解后可能會(huì)有不溶物或油脂狀漂浮物。需12,000g 4℃離心10分鐘，然后吸取澄清的Trizol裂解產(chǎn)物至一新的離心管中。
3. 室溫放置5分鐘，使樣品充分裂解。
4. 每毫升 Trizol加入0.2ml氯仿，vortex混勻或猛烈晃動(dòng)15秒，室溫放置2-3分鐘。
5. 12,000g 4℃離心15分鐘，然后吸取含總RNA的上層無(wú)色水相至一新的離心管中，每毫升Trizol約可吸取0.5-0.55ml。
6. 按每毫升最初的Trizol加入0.5ml異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫沉淀10分鐘。如果希望提取microRNA等小RNA，推薦-70℃沉淀過(guò)夜。
7. 12,000g 4℃離心10分鐘，在管底可見(jiàn)RNA沉淀，棄上清。
8. 每毫升最初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，vortex或顛倒混勻，
9. 7,500g 4℃離心5分鐘，棄上清。再用離心機(jī)甩一下（>5,000rpm, 離心1秒），小心吸盡液體。
10. 待RNA略干后，加入20μl DEPC水溶解，-70℃凍存。注意：切勿讓RNA過(guò)分干燥，否則將極難溶解，且測(cè)出的A260/280值會(huì)低于1.6。