DpnI
DpnI內(nèi)切酶為信裕生物最新研發(fā)產(chǎn)品，基本信息如下：
甲基化干擾？
識(shí)別序列
緩沖液兼容性(%)
酶切溫度
失活條件
GA* ^TC
CT ^A*G
1X B
1X G
1X O
1X R
1X Y
2X Y
37℃
80℃
20min
甲基化的序列
才可被酶切
100
100
50-100
50-100
100
50-100
*，該位點(diǎn)甲基化后才可以被DpnI所識(shí)別并酶切。
DpnI識(shí)別并酶切DNA雙鏈中腺嘌呤N6位甲基化(N6-methyladenine)的GATC序列。DpnI識(shí)別位點(diǎn)中兩個(gè)腺嘌呤的N6位都甲基化時(shí)，呈現(xiàn)正常的酶活力；只有一個(gè)腺嘌呤的N6位甲基化時(shí)，酶切活力會(huì)降低約60倍。
從dam+(Dam甲基化酶表達(dá)陽(yáng)性)大腸桿菌菌株如DH5α等提取的質(zhì)粒的GATC序列中腺嘌呤N6位被甲基化，從而可以被DpnI識(shí)別和酶切；而從dam-(Dam甲基化酶表達(dá)陰性)大腸桿菌菌株如JM110等提取的質(zhì)粒的GATC序列中腺嘌呤N6位沒(méi)有被甲基化，從而不能被DpnI識(shí)別和酶切(參考圖1)。
圖1.DpnI酶活性檢測(cè)結(jié)果圖。A.分別用從JM110菌株(dam-)和DH5α菌株(dam+)中提取的質(zhì)粒400ng，在20μl酶切體系中，分別加入或不加入10U的DpnI，37℃酶切1小時(shí)，然后電泳分析。圖中可見(jiàn)從DH5α中提取得到的甲基化質(zhì)?？梢员籇pnI完全消化，而對(duì)于從JM110中提取得到的非甲基化質(zhì)粒沒(méi)有任何非特異性的酶切作用。B.取圖A中各酶切產(chǎn)物5μl分別轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞然后涂板，培養(yǎng)過(guò)夜。圖中可見(jiàn)從DH5α中提取得到的甲基化質(zhì)粒被DpnI消化1小時(shí)后，不會(huì)產(chǎn)生任何克隆，進(jìn)一步驗(yàn)證了DpnI在1小時(shí)內(nèi)可以完全消化甲基化的質(zhì)粒，并確保本產(chǎn)品可以用于質(zhì)粒點(diǎn)突變。
酶儲(chǔ)存液組成為：10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25℃)，300mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mg/ml BSA and 50% glycerol。
1X Buffer Y組成為：33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassium acetate，0.1mg/ml BSA。
酶切和連接效率：50倍過(guò)量的本內(nèi)切酶消化1小時(shí)，>70%被酶切的pBR322 DNA片段可以重新連接，這些片段>95％可以被重新酶切(recut)。
活性單位定義：在37℃，50微升反應(yīng)體系中反應(yīng)1小時(shí)，將1微克的λDNA完全分解的酶量定義為1個(gè)活性單位，即1U。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
XY-6257-1
DpnI(10U/μl)
500U
XY-6010Y
10X Buffer Y
1ml
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
內(nèi)切酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
如果發(fā)現(xiàn)預(yù)期的酶切位點(diǎn)不能切開(kāi)，請(qǐng)確認(rèn)特定位點(diǎn)是否已經(jīng)被甲基化。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. 單酶切時(shí)可以參考如下反應(yīng)體系進(jìn)行：
說(shuō)明：請(qǐng)注意把Buffer和水等充分混勻后再加入內(nèi)切酶，加入內(nèi)切酶后可以用槍吹打或輕輕Vortex混勻。通常參考上述條件孵育1小時(shí)已經(jīng)足夠，但多孵育數(shù)小時(shí)甚至孵育過(guò)夜也不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。如果酶切較長(zhǎng)時(shí)間甚至酶切過(guò)夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量較大時(shí)，可以適當(dāng)延長(zhǎng)酶切時(shí)間或按比例放大酶切體系。
2. 雙酶切或多酶切時(shí)，需選擇適當(dāng)?shù)目梢约嫒輧蓚€(gè)或多個(gè)內(nèi)切酶的緩沖液，然后參考上表設(shè)置反應(yīng)體系。如果沒(méi)有合適的緩沖液可以選擇，可以在一種酶消化完畢后進(jìn)行純化，純化完畢后再進(jìn)行另外一種酶切反應(yīng)。
關(guān)鍵字： DpnI說(shuō)明書(shū)；DpnI廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾?，并在北京、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。