NdeI
NdeI內(nèi)切酶為進(jìn)口分裝,基本信息如下:
酶儲(chǔ)存液組成為:10mM Tris-HCl(pH7.4 at 25℃),100mM KCl,1mM DTT,1mM EDTA,0.2mg/ml BSA and 50% glycerol。 1X Buffer O組成為:50mM Tris-HCl(pH7.5 at 37℃),10mM MgCl2,100mM NaCl,0.1mg/ml BSA。 1X Buffer Y組成為:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,0.1mg/ml BSA。 酶切和連接效率:50倍過量的本內(nèi)切酶消化1小時(shí),>95%被酶切的片段可以被連接并被重新酶切(recut)。 活性單位定義:在37℃,50微升反應(yīng)體系中反應(yīng)1小時(shí),將1微克的λDNA完全分解的酶量定義為1個(gè)活性單位,即1U。 包裝清單:
保存條件: -20℃保存。 注意事項(xiàng): 內(nèi)切酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明: 1. 單酶切時(shí)可以參考如下反應(yīng)體系進(jìn)行:
說明:請(qǐng)注意把Buffer和水等充分混勻后再加入內(nèi)切酶,加入內(nèi)切酶后可以用槍吹打或輕輕Vortex混勻。通常參考上述條件孵育1小時(shí)已經(jīng)足夠,但多孵育數(shù)小時(shí)甚至孵育過夜也不會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。如果酶切較長時(shí)間甚至酶切過夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量較大時(shí),可以適當(dāng)延長酶切時(shí)間或按比例放大酶切體系。 2. 雙酶切或多酶切時(shí),需選擇適當(dāng)?shù)目梢约嫒輧蓚€(gè)或多個(gè)內(nèi)切酶的緩沖液,然后參考上表設(shè)置反應(yīng)體系。如果沒有合適的緩沖液可以選擇,可以在一種酶消化完畢后進(jìn)行純化,純化完畢后再進(jìn)行另外一種酶切反應(yīng)。
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