包涵體中量純化試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是基因包涵體微量純化試劑盒（CAT#：90508）的中量提取升 級(jí)產(chǎn)品，用于中量，快速的提取高質(zhì)量的包涵體。它具有下列特點(diǎn)：

1. 中量提取，一次可以處理 30-50 mL 的菌液，一次中量提取相當(dāng)于 10-20 次 微量提取。

2. 操作簡(jiǎn)單快速，整個(gè)過(guò)程只要四十分鐘左右。

3. 大規(guī)模提取，可以在 15-50 mL 離心管中完成。

4. 能有效去除包涵體中的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白所占 比重達(dá)到 60%以上。

5. 細(xì)胞裂解通過(guò)非離子洗滌劑的化學(xué)裂解法，裂解更加溫和。 6. 得到的包涵體可以用于重折疊。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 5 次大紙盒包裝
包涵體中量純化溶液 A LM90509A 25 mL
包涵體中量純化溶液 B LM90509B 250 mL
包涵體溶解液 LM90509C 25 mL
溶菌酶 LM100406 3 g
Benzonase(1U/uL) (Cat#:101001) 101001 125 uL
使用手冊(cè) 90509sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，但溶菌酶和 Benzonase 需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一

年。 自備試劑 無(wú)

使用方法 準(zhǔn)備工作：

將 3 g 溶菌酶全部加入到 25 mL 溶液 A 中溶解，然后根據(jù)每次的需要量（一次大量提取需要

3. 加入 5 mL 含溶菌酶的溶液 A 重懸細(xì)胞。

4. 室溫放置 10-20 分鐘裂解細(xì)菌，其間可以用手輕彈離心管混勻。

5. -20℃冷凍至凝固。凝固有利于裂解細(xì)菌，所以一定要凝固到細(xì)菌溶液變成固體。

6. 室溫水浴解凍。如果裂解充分，細(xì)菌釋放出的 DNA 將使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，說(shuō)明裂解不充分，需要重復(fù) 3-6 步，否則完整細(xì)菌將和包涵體一起沉淀，影響包涵體的純度。如有條件好在顯微鏡下檢查細(xì)菌是否充分裂解。

7. 加入 25 uL 的 Benzonase （1U/uL），脫色搖床上搖晃直到裂解液不再粘稠，一般需要 30 分鐘左右（檢查方式是將裂解物傾倒轉(zhuǎn)移到另一離心管中，在轉(zhuǎn)移過(guò)程中看其是否粘稠）。

8. 5,000-7,000 rpm 4℃離心 5 分鐘，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重組蛋白，可以保留作為 SDS-PAGE 對(duì)照樣品。

9. 將沉淀（主要由包涵體構(gòu)成）懸浮在 25 mL 的溶液 B 中，輕柔混勻后室溫放置 5 分鐘。

10. 5,000-7,000 rpm 4℃離心 10 分鐘，小心收集上清,可以作為包涵體一次洗滌的對(duì)照樣品。

11. 將沉淀（主要由包涵體構(gòu)成）懸浮在 25mL 的溶液 B 中，輕柔混勻后室溫放置 5 分鐘。

12. 5,000-7,000 rpm 4℃離心 10 分鐘，小心收集上清作為包涵體第二次洗滌的對(duì)照樣品。一般洗滌兩次就能夠得到足夠純凈的包涵體，如果需要更多洗滌，需要用戶單獨(dú)購(gòu)買包涵體洗滌液（溶液 B）。

13. 得到的沉淀即為包涵體，可以長(zhǎng)期放置在冰箱待用或直接進(jìn)入包涵體的溶解

步驟。 二．包涵體的溶解：

1. 在包涵體沉淀中加入 5 mL 包涵體溶解液，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩。如果低溫放置，包涵體溶解液會(huì)產(chǎn)生沉淀，必須 45-65℃溶化并混勻后才能使用。

2. 室溫放置 1 小時(shí)使蛋白質(zhì)充分溶解。

3. 20000g 4℃離心 20 分鐘，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：檢查離心管能否承受此離心力。SDS-PAGE 檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒(méi)有，說(shuō)明包涵體沒(méi)有完全溶解，需要用適當(dāng)增加包涵體溶解液的用量。

4. 得到的蛋白質(zhì)溶液可以用于復(fù)性等試驗(yàn)。由于不同的蛋白質(zhì)有不同的佳復(fù)性條件，所以本公司不能提供統(tǒng)一的復(fù)性溶液，需要用戶自己摸索。注意：包涵體純化過(guò)程中引入了溶菌酶、DNase 和 RNase 等外源蛋白質(zhì)，在SDS-PAGE 分析時(shí)可能有額外條帶出現(xiàn)。