動(dòng)物細(xì)胞裂解液（變性法）

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞，使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

它具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1. 快速裂解，多種裂解成分經(jīng)過精心優(yōu)化，能快速使細(xì)胞裂解。

2. 非變性（80807A）產(chǎn)品能大程度地保留蛋白天然結(jié)構(gòu)和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，還可以用于蛋白活性檢測(cè)（信號(hào)傳遞研究和酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè)）和 Western Blot 等各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3. 變性（80807B）裂解細(xì)胞的效率更高，主要用于對(duì)抗原空間構(gòu)型不敏感的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，還可以用于 Western Blotting。

4. 適用于培養(yǎng)細(xì)胞（包括懸浮細(xì)胞）和新鮮組織。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào)塑料瓶包裝塑料瓶包裝
動(dòng)物細(xì)胞裂解液（非變性） LM80807A 250 mL -
動(dòng)物細(xì)胞裂解液（變性） LM80807B - 250 mL
使用手冊(cè) LM80807sc 1 份 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸、4℃保存，有效期一年。

自備試劑 PBS 緩沖液

使用方法 注意事項(xiàng)

1、 如果在本產(chǎn)品中額外再加入終濃度為 1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復(fù)

合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。

2、 如果用于信號(hào)傳遞研究，好在本產(chǎn)品中加入終濃度為 1×的、新鮮配制

的磷酸酶抑制劑復(fù)合物。

3、 整個(gè)裂解步驟都要在冰浴或 4℃操作。本產(chǎn)品和 PBS 均需預(yù)先冷卻。

4、 本產(chǎn)品所含有較高濃度的去垢劑會(huì)對(duì) Bradford 蛋白濃度測(cè)定有較大影

響，因此只能使用 BC

3、 按每 106個(gè)細(xì)胞加入 0.1 mL 本產(chǎn)品（或 100mm 貼壁細(xì)胞加 1mL 本產(chǎn)

品）的比例向培養(yǎng)板中加入適量的本產(chǎn)品（按此比例裂解得到的裂解物

的蛋白濃度約在 5-10 mg/mL 之間）。

注意：裂解效率跟細(xì)胞數(shù)量和本產(chǎn)品用量的比例密切相關(guān)。一般情況下 6

孔板的單孔(1～2×106細(xì)胞)需要 0.1~0.2 mL 本產(chǎn)品；25 cm2培養(yǎng)瓶

(3～6×106 細(xì)胞)需要 0.3~0.6 mL；75 cm2 培養(yǎng)瓶(1～2×107 細(xì)胞)

需要 1~2 mL。對(duì)于特別大或特別小的細(xì)胞，需要用戶摸索佳用量。

4、 冰上放置 10-30 分鐘（佳時(shí)間跟細(xì)胞系相關(guān)），其間偶爾輕輕搖晃或用

槍頭輕輕吹打。

5、 將細(xì)胞培養(yǎng)板傾斜使上清液匯集在一端，并將其全部轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5

mL 塑料離心管中。

6、 15,000×g，4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料離

心管中，放置在冰上待用或放-80℃長(zhǎng)期保存。注意：如果用于免疫沉淀，

好新鮮使用。

7、 使用前好先測(cè)定上清液的蛋白濃度，然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western

或免疫沉淀操作。

二：處理懸浮細(xì)胞

1、 400×g，4℃離心 10 分鐘收集懸浮細(xì)胞，棄上清。

2、 用等體積的預(yù)冷 PBS 洗滌細(xì)胞沉淀兩遍，步驟同一步。

3、 按每 106個(gè)細(xì)胞加入 0.1 mL 本產(chǎn)品的比例加入本產(chǎn)品，充分懸浮細(xì)胞。

4、 冰上放置 15 分鐘裂解細(xì)胞，期間偶爾輕柔震蕩。

5、 15,000×g，4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料離

心管中。為避免吸取到細(xì)胞沉淀，好留 20-40uL 液體不取。

6、 將上清液放置在冰上待用或放-80℃長(zhǎng)期保存。注意：如果用于免疫沉淀，

好新鮮使用。

7、 使用前好先測(cè)定上清液的蛋白濃度，然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western

或免疫沉淀操作。

三：處理組織塊

1、 稱量組織塊，用毛玻片或玻璃勻漿器研磨或勻漿，用 5-10 倍體積的、預(yù)冷的 PBS 洗兩次(包括沖洗器材)。

2、 將勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管中，1500g、4℃離心 5 分鐘后棄上清。

3、 按每 50 mg 組織加入 0.2 mL 本產(chǎn)品的比例加入預(yù)冷的本產(chǎn)品，吹打混勻，放置冰上。

4、 每隔 5 分鐘振蕩器輕柔振蕩一次，共 4 次。

5、 15,000×g、4℃離心 10 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 mL 塑料心管中，放置在冰上待用或放-80℃長(zhǎng)期保存。注意：如果用于免疫沉淀，好新鮮使用。

6、 使用前好先測(cè)定上清液的蛋白濃度，然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。