單細胞懸浮液

產品及特點 單細胞裂解液（DNA 專用）是單細胞 DNA 提取專用裂解液，產品經過多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細胞裂解物可以直接用于全基因組擴增和 PCR 等試驗。本產品足夠使用 200 次以上。

胚胎裂解液用于將卵裂球（blastomere，含 2-8 個細胞）分離成單個胚胎的溶液，得到的單個細胞如果用于 DNA 分析（如全基因組擴增或 PCR），則可直接用于單細胞裂解（DNA 型）裂解，如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），則可直接用于單細胞裂解（RNA 型）裂解。本產品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100個細胞）。
規(guī)格及成分 單細胞裂解液（DNA 型）成分表：
成 份 編 號 1 mL 塑料袋包裝
溶液 A 130803A 0.5 mL
溶液 B 130803B 0.5 mL
使用手冊 1 份
胚胎裂解液成分表
成 份 編 號 1 mL 塑料袋包裝
胚胎裂解液 130806 1 mL
使用手冊 1 份
運輸及保存 低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑 PBS

使用方法如何制備單個細胞取決于實驗樣品和實驗者所擁有的儀器設備，此處所列步驟 僅針對培養(yǎng)細胞、實體組織、淋巴細胞和卵裂球（2-8 細胞胚胎）等材料，對其他 材料（如干細胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單細 胞。對已經處于單細胞懸浮狀態(tài)的細胞（如 FACS 分離細胞、卵細胞等），則可以 跳過制備過程而直接進入單細胞裂解步驟：

一、準備單細胞裂解工作液

1. 裂解一個細胞需要 2.5uL 裂解液工作液。根據所要裂解的細胞數(shù)準備足夠的 裂解液工作液。工作液的制備方法是將等體積的溶液 A 和溶液 B 混合即得。

2. 在每個 200uL PCR 管中加入 2.5 uL 新鮮制備的單細胞裂解液工作液，放置 在冰上待用。

二、用培養(yǎng)細胞或實體組織制備單細

3. 按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細胞或組織，將細胞重懸于自備的液體細胞培養(yǎng)基 中。 4. 按常規(guī)方法對細胞進行計數(shù)。

5. 轉移 100-4000 個細胞到新離心管中，400g 離心 4 分鐘沉淀細胞，小心棄 上清（培養(yǎng)基）。

6. 將細胞沉淀重懸于 50uL 自備的 PBS 中，使其終濃度為 2-80 個細胞/uL。

7. 在干凈培養(yǎng)皿上點加數(shù)個 5uL PBS 小液滴，加入 5 uL 細胞懸浮液到一個 小液滴中，然后再從一個小液滴中轉移 5uL 到第二個小液滴，如此系列稀 釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5uL 液體中含 1 個細胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 細胞胚胎）制備單個細胞：

8. 在培養(yǎng)皿中點數(shù)個含 5uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。

9. 顯微鏡下用微量注射液加入一個卵裂球到一個胚胎裂解液小液滴中。

10. 轉移幾次到后面的幾個液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。

11. 在最有一個液滴中，卵裂球的幾個細胞將彼此分開成單個細胞。

12. 取單個細胞，轉移到數(shù)個含 5uL PBS 的小液滴中洗滌掉胚胎裂解液。

13. 在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個細胞的 2.5 uL 樣品并轉移到一個 200uL 的 PCR 管中待用。同時設置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含 細胞）。

三：用單細胞裂解液裂解細胞

14. 在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品，確認含一個細胞后，將其轉移到一 個含 2.5 uL 單細胞裂解液的 PCR 管中。好同時設置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細胞）。在 2.5uL 樣品中，

15. 顯微鏡下細胞懸液可直接用于單細胞裂解反應。

16. 裂解后可以放冰上待用，如果長期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置 過 30 分鐘到一周時間的樣品 PCR 擴增效果好。

四：單細胞裂解物的 PCR 擴增

17. 細胞裂解物從-80℃中取出后，先在 65℃中保溫 10 分鐘，然后在放冰上放置 待用。

18. 以上步得到的細胞裂解物為模板。按常規(guī)方法進行 PCR。