單細(xì)胞懸浮液

產(chǎn)品及特點 單細(xì)胞裂解液（DNA 專用）是單細(xì)胞 DNA 提取專用裂解液，產(chǎn)品經(jīng)過多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞，維持核酸的穩(wěn)定性。單細(xì)胞裂解物可以直接用于全基因組擴增和 PCR 等試驗。本產(chǎn)品足夠使用 200 次以上。

胚胎裂解液用于將卵裂球（blastomere，含 2-8 個細(xì)胞）分離成單個胚胎的溶液，得到的單個細(xì)胞如果用于 DNA 分析（如全基因組擴增或 PCR），則可直接用于單細(xì)胞裂解（DNA 型）裂解，如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），則可直接用于單細(xì)胞裂解（RNA 型）裂解。本產(chǎn)品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100個細(xì)胞）。
規(guī)格及成分 單細(xì)胞裂解液（DNA 型）成分表：
成 份 編 號 1 mL 塑料袋包裝
溶液 A 130803A 0.5 mL
溶液 B 130803B 0.5 mL
使用手冊 1 份
胚胎裂解液成分表
成 份 編 號 1 mL 塑料袋包裝
胚胎裂解液 130806 1 mL
使用手冊 1 份
運輸及保存 低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑 PBS

使用方法如何制備單個細(xì)胞取決于實驗樣品和實驗者所擁有的儀器設(shè)備，此處所列步驟 僅針對培養(yǎng)細(xì)胞、實體組織、淋巴細(xì)胞和卵裂球（2-8 細(xì)胞胚胎）等材料，對其他 材料（如干細(xì)胞克隆、胚囊、胚胎組織等），用戶需自行選用合適的方法制備單細(xì) 胞。對已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞（如 FACS 分離細(xì)胞、卵細(xì)胞等），則可以 跳過制備過程而直接進入單細(xì)胞裂解步驟：

一、準(zhǔn)備單細(xì)胞裂解工作液

1. 裂解一個細(xì)胞需要 2.5uL 裂解液工作液。根據(jù)所要裂解的細(xì)胞數(shù)準(zhǔn)備足夠的 裂解液工作液。工作液的制備方法是將等體積的溶液 A 和溶液 B 混合即得。

2. 在每個 200uL PCR 管中加入 2.5 uL 新鮮制備的單細(xì)胞裂解液工作液，放置 在冰上待用。

二、用培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶓w組織制備單細(xì)

3. 按常規(guī)胰酶方法處理培養(yǎng)細(xì)胞或組織，將細(xì)胞重懸于自備的液體細(xì)胞培養(yǎng)基 中。 4. 按常規(guī)方法對細(xì)胞進行計數(shù)。

5. 轉(zhuǎn)移 100-4000 個細(xì)胞到新離心管中，400g 離心 4 分鐘沉淀細(xì)胞，小心棄 上清（培養(yǎng)基）。

6. 將細(xì)胞沉淀重懸于 50uL 自備的 PBS 中，使其終濃度為 2-80 個細(xì)胞/uL。

7. 在干凈培養(yǎng)皿上點加數(shù)個 5uL PBS 小液滴，加入 5 uL 細(xì)胞懸浮液到一個 小液滴中，然后再從一個小液滴中轉(zhuǎn)移 5uL 到第二個小液滴，如此系列稀 釋樣品數(shù)次，使得其濃度接近每 2.5uL 液體中含 1 個細(xì)胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 細(xì)胞胚胎）制備單個細(xì)胞：

8. 在培養(yǎng)皿中點數(shù)個含 5uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。

9. 顯微鏡下用微量注射液加入一個卵裂球到一個胚胎裂解液小液滴中。

10. 轉(zhuǎn)移幾次到后面的幾個液滴中以便將帶入的培養(yǎng)基稀釋掉。

11. 在最有一個液滴中，卵裂球的幾個細(xì)胞將彼此分開成單個細(xì)胞。

12. 取單個細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到數(shù)個含 5uL PBS 的小液滴中洗滌掉胚胎裂解液。

13. 在顯微鏡下用顯微注射儀取只含一個細(xì)胞的 2.5 uL 樣品并轉(zhuǎn)移到一個 200uL 的 PCR 管中待用。同時設(shè)置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含 細(xì)胞）。

三：用單細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞

14. 在顯微鏡下用顯微注射儀取 2.5 uL 樣品，確認(rèn)含一個細(xì)胞后，將其轉(zhuǎn)移到一 個含 2.5 uL 單細(xì)胞裂解液的 PCR 管中。好同時設(shè)置無樣品的陰性對照（2.5 uL 樣品中不含細(xì)胞）。在 2.5uL 樣品中，

15. 顯微鏡下細(xì)胞懸液可直接用于單細(xì)胞裂解反應(yīng)。

16. 裂解后可以放冰上待用，如果長期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置 過 30 分鐘到一周時間的樣品 PCR 擴增效果好。

四：單細(xì)胞裂解物的 PCR 擴增

17. 細(xì)胞裂解物從-80℃中取出后，先在 65℃中保溫 10 分鐘，然后在放冰上放置 待用。

18. 以上步得到的細(xì)胞裂解物為模板。按常規(guī)方法進行 PCR。