可視化LAMP直接擴(kuò)增試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒是本公司通用型 LAMP 試劑盒的基礎(chǔ)上開發(fā)的免 DNA 提取可視化LAMP 試劑盒，它有下列特點(diǎn)：

1. 不需要專門提取 DNA，直接用細(xì)胞裂解將液進(jìn)行 LAMP，極大縮短了實(shí)驗(yàn)。

2. 適用于病毒、細(xì)菌、真菌、植物、動(dòng)物的各種形式的樣品，包括實(shí)體組織、液體樣品。

3. 使用 2×可視化 LAMP MagicMix，可視化肉眼檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 使用改良的 WarmStart Bst DNA 聚合酶，反應(yīng)特異性更強(qiáng)。

5. 高擴(kuò)增效率更高，擴(kuò)增效率可達(dá)到 10E9-10E10，比 PCR 靈敏一個(gè)數(shù)量級(jí)，可檢測(cè)到單拷貝的 DNA 分子。

6. 本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的免 DNA 提取 LAMP 擴(kuò)增。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研目的。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 十孔盒包裝
免 DNA 提取溶液 A 成分一 130985a1 100 uL
免 DNA 提取溶液 A 成分二 130985a2 200 uL
免 DNA 提取溶液 B 130985b 1 mL
2×可視化 LAMP MagicMix 180601a 500 uL
LAMP 陽性對(duì)照模板-引物混合物 180601b 50 uL
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè) 180601sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 LAMP 樣品及 LAMP 引物

使用方法

 1. 配制免 DNA 提取溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足夠 10 個(gè)樣品）為例：在一干凈塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超純水，充分混合均勻即得 1mL 溶液 A 工作液。一次檢測(cè)一個(gè)樣品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足夠 10 個(gè)樣品。沒用完的工作液可室溫放置，但在一周內(nèi)用完，不要長期放置。如果待測(cè)樣品數(shù)量為其他數(shù)字，配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。

2. 根據(jù)材料不同參考下表取少量樣品到一干凈的塑料離心管中。

樣品種類 取用量

動(dòng)物組織 1-5 mg

鼠尾 2mm 長

血液樣品 不超過 20 uL

植物葉片 1-5 mg

植物種子（去皮） 1-5 mg

酵母培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物沉淀

細(xì)菌培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物沉淀

注意：未列出樣品，用戶需要自己摸索用量。對(duì)富含多醌多酚的植物材料（如

棉花），組織使用量不要超過 0.5mg。

3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液，確保樣品被溶液淹埋。

4. 95℃保溫 10 分鐘。

5. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得細(xì)胞裂解液，放冰上待用。如果暫時(shí)不用，可以放-20℃長期保存。

6. 配制自備的 5×LAMP 引物混合液。

先加超純水（不要用 TE）將各引物干粉稀釋到母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物和超純水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的 5×LAMP 引物混合液體積大于或小于 1mL，則各成分的用量請(qǐng)按比例調(diào)整。此混合液可以在-20℃放置 2 年。引物名稱 母液濃度 加入量 在混合液中濃度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超純水 780 uL

7. 在新的塑料管中設(shè)置 LAMP 反應(yīng)（以一個(gè)樣品為例）：成份 樣品管 陽性對(duì)照 陰性對(duì)照2×可視化 LAMP Mix 10 uL 10 uL 10 uL自備 5×LAMP 引物混合液 4 uL - 4 uL細(xì)胞裂解液 1-2 uL - -

LAMP 陽性對(duì)照模板-引物混合物 - 4 uL -

補(bǔ)超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

8. 混勻，此時(shí)反應(yīng)液呈現(xiàn)淡紫色。置于 60-65℃保溫 60-120 分鐘（具體溫度根據(jù) LAMP 引物的 Tm 值決定）。如果是在 PCR 儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫，沒有熱蓋，建議覆蓋 50uL 石蠟油，否則保溫期反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，影響反應(yīng)效率。

9. 80℃10 分鐘滅活 Bst DNA 聚合酶。

10. 如果有陽性擴(kuò)增，則反應(yīng)液將變成淡藍(lán)色，如果沒有陽性擴(kuò)增，反應(yīng)液將還是淡紫色。標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)結(jié)果如下圖（左邊 6 個(gè)為陽性，右邊 2 個(gè)為陰性）：

11. 電泳確認(rèn)：取擴(kuò)增產(chǎn)物 5 uL 直接在 2%的瓊脂糖凝膠電泳（不需要再加上樣液），可見 LAMP 特征性電泳圖譜。電泳需要打開反應(yīng)管的蓋子，釋放出的氣溶膠非常容易污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境，為下次擴(kuò)增帶來假陽性，所以一定要在隔離的地方進(jìn)行電泳分析。

12. 結(jié)果分析：如果陽性對(duì)照能夠擴(kuò)增而陰性對(duì)照不能擴(kuò)出，則實(shí)驗(yàn)有效。如果陽性對(duì)照沒有擴(kuò)增出條帶，則試劑盒的問題，請(qǐng)跟廠家聯(lián)系。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增出條帶，則說明 LAMP 樣品或試劑有擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，需要注意操作的規(guī)范性，重新設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增新的靶片段。