包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝
產(chǎn)品及特點用 E.coli 作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白質(zhì)只完成部分折疊，還沒形成最后的正確空間結(jié)構(gòu)，所以沒有生物活性，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續(xù)的溶解和復(fù)性（重折疊）處理。目前最常用的溶解包涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋白質(zhì)被徹底變性，使后續(xù)的蛋白質(zhì)復(fù)性處理效率降低。由于包涵體中的重組蛋白質(zhì)已經(jīng)完成了部分折疊，因此本公司基于此事實設(shè)計出了此款溫和溶解-復(fù)性試劑盒，
它具有下列特點：
1. 一站式，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質(zhì)復(fù)性的所有試劑。
2. 采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質(zhì)不徹底變性，還能保持其部分折疊的結(jié)構(gòu)，使后續(xù)的復(fù)性處理效率提高。
3. 所用復(fù)性液基于稀釋復(fù)性，經(jīng)過精心優(yōu)化，有利于大部分蛋白的復(fù)性。
4. 還提供五種不同的添加劑，它們可以單獨加入復(fù)性液，也可以按一定比例進行自由組合，以適應(yīng)不同的蛋白質(zhì)折疊需求。
5. 本試劑盒提供實惠的小規(guī)格，用于做預(yù)實驗用，用戶如果選擇到合適的溶液組合后，可以單獨購買其中任何一個溫和溶液以用于大量制備。
6. 本試劑盒足夠 100 次小規(guī)模（1mL 規(guī)模）的蛋白質(zhì)復(fù)性實驗。
包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝
包涵體洗滌液 100302a 250 mL
包涵體溫和溶解液之 1 100302b1 10 mL
包涵體溫和溶解液之 2 100302b2 10 mL
包涵體溫和溶解液之 3 100302b3 10 mL
包涵體溫和溶解液之 4 100302b4 10 mL
包涵體溫和溶解液之 5 100302b5 10 mL
包涵體溫和溶解液之 6 100302b6 10 mL
包涵體溫和溶解液之 7 100302b7 10 mL
包涵體溫和溶解液之 8 100302b8 10 mL
包涵體溫和溶解液之 9 100302b9 10 mL
包涵體溫和溶解液之 10 100302b10 10 mL
包涵體蛋白質(zhì)復(fù)性液 100302c 250 mL
使用手冊 100302sc 1 份
包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。
自備試劑 去離子水、BCA 蛋白濃度測定試劑盒、0.22 um 注射器式濾膜
使用方法
一、洗滌包涵體：用常規(guī)方法得到的包涵體常常含有去污劑和細胞碎片，因此需
要經(jīng)過充分的洗滌才能用于本實驗。
1. 將 10mg 包涵體沉淀溶解在 5mL 包涵體洗滌液中，超聲波處理 8 次或充分吹打混勻。可以適當留取 10-30uL 作為 SDS-PAGE 電泳樣品待用。
2. 4℃ 12000 rpm 離心 20 分鐘后棄上清。
3. 重復(fù)上面的洗滌步驟 3 次，每次留取 30uL 作為 SDS-PAGE 電泳樣品待用。
4. 將包涵體沉淀溶解在 1 mL 包涵體洗滌液中，超聲波處理 8 次或充分吹打混勻。
5. 檢查包涵體的純度：將上步得到的包涵體溶液和前幾步得到的預(yù)留樣品一起用于 SDS-PAGE 電泳，檢查每次洗滌去除雜帶的情況。
6. 檢查包涵體的濃度：用自備的 BCA 蛋白檢測試劑盒測試第 4 步得到的包涵體溶液的蛋白質(zhì)濃度。
7. 將第 4 步得到的包涵體溶液的蛋白質(zhì)濃度調(diào)到 5-10 mg/mL(如果低于此范圍，則離心后用適量的洗滌液再溶解；如果高于此范圍，則用洗滌液稀釋)，然后均分到 10 個 1.5 mL 塑料離心管中，每管 100 uL。
8. 4℃ 12000 rpm 離心 20 分鐘后棄上清。
9. 所得沉淀即純化的待用的包涵體。
二、確定溶解包涵體的條件：
1. 標記上步得到的 10 個離心管，并分別加入 10 種包涵體溫和溶解液，每種 1mL。注意：準確記錄它們的對應(yīng)關(guān)系。
2. 充分振蕩后，室溫放置 30 分鐘。
3. 450 nm 檢測渾濁度并記錄下數(shù)據(jù)。
4. 4℃ 12000 rpm 離心 10 分鐘后收集上清，此即包涵體溶解液。
5. 用 0.22 um 注射器式濾膜過濾包涵體溶解液。
6. 280 nm 檢測包涵體溶解液的光吸收。
7. 溶解液溶解包涵體能力跟包涵體溶液濁度跟成反比，跟包涵體溶解液中OD280 數(shù)值成正比。根據(jù)上面的數(shù)據(jù)即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體具有溶解能力，并將在此溶解液中溶解的包涵體溶解液用于下面的復(fù)性實驗。大量處理需要從本公司大量訂購包涵體溫和型溶解液 10 種中的任 1 種。
三．包涵體蛋白的復(fù)性：
1. 在 2.5 mL 4℃預(yù)冷的、處于輕柔攪拌中的復(fù)性緩沖液中，逐滴加入上步得到的包涵體溶解液。
2. 待所有包涵體溶解液都加完后，將包涵體蛋白復(fù)性溶液用孔徑為 0.22 um 注射器式濾膜過濾，除去包涵體（直徑一般在 0.5-0.8 um）和大的聚合物。
3. 將得到的溶液用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩層析。
關(guān)鍵字： 液廠家；液現(xiàn)貨
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾＃⒃诒本?、廣東，江西，吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。