填入法DNA探針生物素末端標(biāo)記試劑盒

原理及特點(diǎn)本產(chǎn)品是基于 DNA 聚合酶能夠在 DNA 粘性末端的 3’凹端摻入 dNTP 的原理而設(shè)計(jì)，該反應(yīng)的示意圖如下： 本產(chǎn)品是在上述原理的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的，具有下列特點(diǎn)：

1. 快速，15 分鐘即可完成標(biāo)記反應(yīng)。

2. 可用于任何 3’凹端的 DNA 片段。

3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛標(biāo)記的核苷酸等）。

4. 提供不帶標(biāo)記核苷酸、帶生物素標(biāo)記核苷酸和帶地高辛標(biāo)記核苷酸三種 選擇。  

5. 同時(shí)提供非標(biāo)記的 dNTP，用戶可以根據(jù)粘性末端序列使用。

6. 標(biāo)記的探針可用于電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）、原位雜交（ISH）、Northern Blot（不推薦用于低豐度 RNA 檢測(cè)）、小 RNA Northern、Southern Blot （不推薦用于單拷貝基因檢測(cè)）、菌落雜交、斑點(diǎn)印跡雜交分析等。

7. 本產(chǎn)品足夠 5 次 20uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)。

8. 本產(chǎn)品僅供科研使用。 
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 十孔盒包裝
Klenow DNA 聚合酶 131235a 10 uL（紅蓋）
10×Klenow DNA 聚合酶緩沖液 131235b 10 uL（白蓋）
dATP 溶液，2.5mM 130912 10 uL（黃蓋）
dTTP 溶液，2.5mM 130913 10 uL（綠蓋）
dGTP 溶液，2.5mM 130914 10 uL（藍(lán)蓋）
dCTP 溶液，2.5mM 130915 10 uL（紫蓋）
Biotin-11-dUTP 溶液 120653b 10uL（本色蓋僅 B 型）
DIG-11-dUTP 溶液 120653c 10uL（本色蓋僅 C 型）
超純水 100935 1 mL（藍(lán)蓋）
使用手冊(cè) 120653sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年

自備試劑 DNA 模板

使用方法1. 在 0.2 mL 微量離心管中按下表設(shè)置一個(gè) 20uL 體系的標(biāo)記反應(yīng)（如果需 要標(biāo)記更多探針，請(qǐng)?jiān)黾訕?biāo)記體積而不要增加探針 DNA 的濃度）： 成份 用量 待標(biāo)記 DNA（3’凹陷） 100-200 pmol Klenow DNA 聚合酶緩沖液，10× 2 uL 自備標(biāo)記核苷酸（A 型） 或 Biotin-11-dUTP 溶液（B 型） 或 DIG-11-dUTP 溶液（C 型） 1 uL 與標(biāo)記核苷酸不相同的三種非標(biāo)記 核苷酸，2.5mM(對(duì) B 型和 C 型，標(biāo) 記的是 dUTP，相當(dāng)于 dTTP，因此 應(yīng)該加 dATP、dCTP 和 dGTP) 各 1uL，共 3uL Klenow DNA 聚合酶 1 uL 超純水 補(bǔ)到 20 uL

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。 

3. 70℃ 10 分鐘滅活 Klenow DNA 聚合酶。

4. 如果需要，可以用斑點(diǎn)雜交法檢測(cè)標(biāo)記效率（本產(chǎn)品不含相關(guān)試劑）。

5. 如果是非同位素標(biāo)記，探針不需純化可以直接用于雜交。如果需要純化非 同位素標(biāo)記的探針，請(qǐng)不要酚/氯仿抽提，因?yàn)榉峭凰貥?biāo)記物一般會(huì)使 探針 DNA 進(jìn)入有機(jī)相而丟失。

6. 使用時(shí)需將探針以 1-8 ng/uL 的終濃度加入到雜交液中（如果探針是雙 鏈 DNA，加入前還需熱變性）。如果不立即使用，非同位素標(biāo)記的探針 DNA 可-20℃長(zhǎng)期放置一年，同位素標(biāo)記的探針 DNA 不能放置。