沉淀法miRNA分離試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)

microRNA(miRNA)和 RNA 干擾研究是當(dāng)今分子生物學(xué)研究的一大熱點(diǎn)，但快速分離和純化相關(guān)的小 RNA 十分棘手，是目前研究 miRNA 的主要技術(shù)障礙之一。目前國(guó)外相關(guān)產(chǎn)品寥寥無(wú)幾，并且基本采用先提總 RNA 再富集其中的小 RNA 的兩步法策略，國(guó)內(nèi)相關(guān)產(chǎn)品更是一片空白。天澤基因?yàn)闈M(mǎn)足廣大用戶(hù)的需求，開(kāi)發(fā)了具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

1. 從總 RNA 中直接分離純化小 RNA，不需要使用離心吸附柱。得到的小RNA 長(zhǎng)度大部分在 200 nt 以下，包括 5S RNA、tRNA、 miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA 和 snRNA 等。

2. 操作簡(jiǎn)單快速，整個(gè)過(guò)程只需要約 30 分鐘。

3. 小 RNA 純凈，OD260/280 一般都在 1.9 以上。

4. 可用于 RT-PCR、miRNA 標(biāo)記、microarray 等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

5. 此方法能去除 90%左右的大 RNA，但會(huì)有少量殘留大 RNA，如果需要純度更高，可以選擇 PAGE 回收法。
規(guī)格及成分 成 份 50 次包裝 
溶液 A 5 mL 溶液 B 10 mL 溶液 C 50 mL RNase-free 水 10 mL 使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸.4℃保存，有效期一年。

自備試劑 RNase-free 塑料離心管。

使用方法 

1. 在純化好的 100 uL 總 RNA（含大 RNA 和小 RNA）中，加入 50 uL溶液 A，振蕩 30 秒混勻。如果 RNA 樣品體積不足 100 uL，可以用RNase-free 水補(bǔ)足，如果體積超過(guò) 100 uL，可以用本公司核酸濃縮劑濃縮到 100 uL。

2. 室溫 12000-15000 g 離心 30 分鐘。小 RNA 在上清中，大 RNA 在沉淀中。注意：離心時(shí)間不能短于 30 分鐘，否則大 RNA 沉淀不充分。

3. 小心將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的 1.5 mL RNase-free 塑料離心管中。留下的沉淀可以用75%乙醇洗滌后做大 RNA 電泳對(duì)照用。

4. 在上清液中加入 200 uL 溶液 B，振蕩 30 秒混勻。

5. 室溫 12000-15000 g 離心 10 分鐘，小心棄上清。由于溶液 B 中有惰性的助沉劑，所以得到的小 RNA 沉淀肉眼可見(jiàn)。

6. 加入 1 mL 溶液 C，震蕩數(shù)秒。

7. 室溫 12000-15000 g 離心 10 分鐘，小心棄上清。

8. 短暫離心數(shù)秒，小心吸棄殘留液體（約 50 uL 左右）。

9. 在沉淀中（含小 RNA）加入 30-100 uL RNase-free 水，吹打溶解即得小 RNA 溶液。注意：不能只吹打管底部分，還需要吹打整個(gè)離心管管壁的離心面部分，因?yàn)樯厦嬉灿行?RNA 沉淀。

10. 好先 PAGE-銀染檢測(cè)小 RNA 純度再使用。