無RNase的DNase溶液

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是從牛胰 DNase 中精制的無 RNase 污染的 DNase，專門用于降 解 RNA 樣品中的 DNA 污染，具有下列特點(diǎn)：

1. 高效，能使總 RNA 中的基因組 DNA 污染降低到電泳檢測不到的水平。

2. 同時降解單鏈 DNA 和雙鏈 DNA。

3. 不含 RNase，可以保證 RNA 分子完整性不受任何影響。

4. 反應(yīng)條件經(jīng)過優(yōu)化，可以用于快速降解硅膠膜上吸附的 DNA，也可以用 于快速降解液體反應(yīng)體系中的 DNA。

5. 可以用于總 RNA 提取和體外轉(zhuǎn)錄中去除 DNA。也可用于切口平移（Nick Translation）和 DNase 印跡法研究 DNA-蛋白質(zhì)相互作用。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 塑料袋包裝
RNase-free DNase（1U/uL） LM90903a 500 uL×2 10×DNase Buffer LM90903b 1000 uL 50 mM EDTA 溶液 LM90903c 1000 uL 使用手冊 LM90903sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 超純水。 

使用方法

一、去除 RNA 樣品中污染的基因組 DNA（僅供參考，本試劑盒不含 RNase-free DNase 以外的所需試劑）

1. 在一無 RNA 酶的離心管中配制 10 μL 的反應(yīng)液： 成份 用量 RNA 樣品 1 ug 10×DNase Buffer 1 uL RNase-free DNase（1 U/uL） 1 uL 自備的 RNase inhibitor（40 U/uL） 0.5-1 uL (可不加) 補(bǔ)超純水到 10 uL

2. 混勻，短暫離心，37℃放置 30 分鐘；

3. 加入2 uL 50 mM EDTA 溶液，65℃放置15分鐘。此步可以滅活DNase。 RNA 在加熱時容易水解，也可以使用酚/氯仿抽提去除 DNase，然后再 乙醇沉淀 RNA。如果 RNA 在 20ug 以上，也可以使用本公司的 RNAclean 試劑盒進(jìn)行柱式純化，回收 RNA。

4. 電泳檢測是否去除了基因組 DNA，然后進(jìn)行后續(xù)實驗。 二、除去硅膠膜離心吸附柱上的 DNA（僅供參考，本試劑盒不含 RNase-free DNase 以外的所需試劑） 1. 在柱式法提取過程中，完成洗滌步驟。 2. 配制 50 uL DNase 工作液。 成份 用量 10×DNase Buffer 5 uL RNase-free DNase（1U/uL） 10 uL 自備 RNase inhibitor（40U/uL） 0.5-1 uL（也可不加） 加超純水到 50 uL 3. 加在離心吸附柱中間，室溫放置 5-30 分鐘。 4. 加入 0.5 mL 自備洗柱液洗滌兩次。

5. 用 RNA 洗脫液洗脫即得無 DNA 的 RNA 樣品。 三、除去 RNA 體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的 DNA 模板（僅供參考，本試劑盒不含 RNase-free DNase 以外的所需試劑）

1. 按 2 U RNase-free DNase/ug DNA 模板的比例在 RNA 體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 中加入 RNase-free DNase。注意：酶的用量也許需要優(yōu)化。

2. 37℃放置 15 分鐘。

3. 加入2 uL 50 mM EDTA 溶液，65℃放置15分鐘；此步可以滅活DNase。 RNA 在加熱時容易水解，也可以使用酚/氯仿抽提去除 DNase，然后再 乙醇沉淀RNA。如果RNA 在20 ug以上，也可以使用本公司的RNAclean 試劑盒（需另購）進(jìn)行柱式純化，回收 RNA。 四、用于切口平移法（Nick Translation）DNA 探針標(biāo)記（僅供參考，本試 劑盒不含 RNase-free DNase 以外的所需試劑）

1. 按下表設(shè)置切口平移標(biāo)記反應(yīng)： 成份 用量 10×DNA 聚合酶 I 緩沖液 2.5 uL 3 dNTP mixture，1 mM each 1.25 uL 標(biāo)記核苷酸：非標(biāo)記核苷酸混合（3：7，1mM） 1 uL RNase-free DNase（0.002 U/uL，見注） 1 uL DNA 聚合酶 I（10U/uL） 0.5-1.5 uL 模板 DNA 0.25 ug 加水到 25 uL 注：稀釋 RNase-free DNase 的緩沖液為 1×DNA 聚合酶 I 緩沖液：50 mM 2. 15℃放置 15-60 分鐘。

3. 加入 10 uL 50 mM EDTA 溶液。

4. 65℃放置 15 分鐘滅活酶。

5. 所得探針可以純化后使用，也可以直接使用。