2XLAMP MagicMix(無色）
產品及特點 本產品是 2×LAMP MagicMix（無色），可以用于 LAMP 等溫擴增，LAMP 即Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導等溫擴增），是 2000 年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴增方法。它利用 4 條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的 DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60 分鐘完成擴增。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優(yōu)于 PCR 技術，同時還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、等過程。目前已成功應用于人類及動植物、細菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測。本試劑盒具有下列特點：

1. 即開即用的 2×LAMP MagicMix，無色。

2. 高特異性，由于同時使用 4-6 條特異引物，所以特異性比 PCR 更高。

3. 高擴增效率，擴增效率可達到 10E9-10E10，比PCR 靈敏一個數量級，可檢測到單拷貝的 DNA 分子

4. 65℃左右等溫擴增，可以不需要貴重的熱循環(huán)儀。

5. 即開即用，包含了除引物和模板 DNA 外的所有成份，十分方便。

6. 本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴增。

7. 提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。

8. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。

2XLAMP MagicMix(無色）
規(guī)格及成分 成 份 編 號 熱封袋包裝
2×LAMP MagicMix（無色） 190601a 500 uL（綠色蓋）
LAMP 陽性對照模板-引物混合物 130923a 45 uL（黃色蓋）
使用手冊 190601sc 1 份

2XLAMP MagicMix(無色）運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 LAMP 模板、LAMP 引物、自備可見光染料

使用方法 1. 制備模板DNA：選用合適的方法制備模板DNA。

2. 配制自備的5×LAMP引物混合液。先加超純水或自備TE緩沖液將自備的下列6種（或4種）引物干粉稀釋到母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足夠250次20uL體系的LAMP擴增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液體積異于1mL，則各成分的用量請按比例調整。引物混合液可以在-20℃放置2年。引物名稱 母液濃度 加母液量

在 5×LAMP 引物

混合液中的濃度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超純水 780 uL

如果沒有 Loop 引

物，則用水替代

終體積 1 mL

3. 在冰上融化2×LAMP MagicMix，混勻，稍離心。如果有N個樣品，則在

N+2個反應管中加入以下組份：

成份 樣品管 LAMP

陽性對照

LAMP

陰性對照

2×LAMP MagicMix（無色） 10 uL 10 uL 10 uL

自備 5×LAMP 引物混合液 4 uL 不加 4 uL

自備模板 DNA 1-100ng 不加 不加

LAMP 陽性對照模板-引物混合物 不加 4 uL 不加

補自備超純水到 20 uL 20 uL 20 uL

注意：此步可加入自備的各種LAMP可視化染料，這樣反應結束后可以根據反應液的顏色變化或實時熒光強度變化來判斷是否有擴增，不需要開蓋，避免污染。如果加入了熒光染料，則需要在熒光定量PCR儀上進行反應和實時檢測。

4. 混勻，置于63℃保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴或水浴保溫，沒有熱蓋，必須覆蓋50uL的石蠟油，否則保溫期間反應體系的水分會蒸發(fā)，影響反應效率。

5. 產物取擴增產物5 uL上樣，進行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，可見LAMP特征性電泳圖譜。

6. 結果分析：如果本試劑盒提供的陽性對照-引物混合物能夠擴增而陰性對照不能擴出，則實驗有效。如果陽性對照-引物混合物沒有擴增出條帶，則試
劑盒的問題，請跟廠家聯(lián)系。如果陰性對照（水作為模板）有擴增出條帶，則說明LAMP樣品或試劑有過去的擴增產物的污染，需要注意操作的規(guī)范性，如果不能解決，可以重新設計引物擴增新的靶片段。也可以使用不需要開蓋的2×可視化LAMP MagicMix。