柱式病毒RNA提取試劑盒

柱式病毒RNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn) 

本產(chǎn)品是在天澤基因一管式病毒 RNAOUT 的基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品中提取微量病毒 RNA 的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)： 1. 操作簡單，整個(gè)過程只需要 20 分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補(bǔ)加乙醇。 2. 靈敏度高，通過 RT-PCR 檢測到的最終靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/mL。 3. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機(jī)溶液。 4. 如果加上病毒離心富集步驟，最多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。 5. 與 RT-PCR 和熒光 RT-PCR 兼容。 6. 價(jià)廉物美，性價(jià)比遠(yuǎn)低于國外同類產(chǎn)品。 7. 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細(xì)胞上清液等無細(xì)胞材料。

規(guī)格及成分 

成份 編號 大紙盒包裝 RNA 病毒裂解液 3073a 30 mL 上柱結(jié)合液 190602 40 mL 離心吸附柱 60911 50 套通用洗柱液 60408 50 mL RNA 洗脫液 71207 10 mL 使用手冊 71001sc 1 份

運(yùn)輸及保存 

常溫運(yùn)輸和保存，RNA 病毒裂解液長期（1 周）放置需放 4℃，有效期一年。

自備試劑 

無

使用方法 

如果有 N 個(gè)樣品，標(biāo)記 N+2 個(gè) 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006)，多出的一個(gè)為陽性對照，一個(gè)為陰性對照。為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個(gè)管上做個(gè)標(biāo)記，以在后續(xù)操作時(shí)區(qū)別向心面和離心面。然后各加入 0.2 mL 液體樣品（血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等等）。 1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品，則將拭子放入 0.2mL 自備生理鹽水中擠壓出液體，然后取 0.2mL 進(jìn)行提取。 1.2、 如果是糞便等半固定樣品，則取約 0.3mL 的樣品，加入 0,3 自備生理鹽水，震蕩重懸，離心取 0.2mL 上清進(jìn)行提取。 1.3、 如果血液，細(xì)胞培養(yǎng)液等含細(xì)胞的液體，可以離心用上清，也可以直接取用，但后者提取的 RNA 中有細(xì)胞的基因組 DNA 污染。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用 ACD 時(shí)由于所加入 ACD 會增加體積，樣品會被稀釋，得到的病毒滴度會比使用 EDTA 低 15%左右。血漿按 0.6mL/ 管的量分裝保存，以避免反復(fù)凍融。 1.4、 如果樣品是實(shí)體組織或培養(yǎng)細(xì)胞，則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心，用 0.2mL 上清液（含病毒）進(jìn)行提取，但此種情況下最后得到的 RNA 不可避免的會含有基因組 DNA 污染。 1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 繼續(xù)操作。 2. 加入 0.6 mL RNA 病毒裂解液，振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘。注意：RNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。 3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中，顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液（0.8 mL）到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。 4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。 5. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。 6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。 7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。 8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。 9. 12000 g 室溫離心半分鐘。 10. 在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL RNA 洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的 1.5 mL 離心管中，室溫放置 2 分鐘。 11. 12000 g 室溫離心 1 分鐘，離心管中收集的樣品即為 RNA。 12. RNA 樣品可以直接用于 RT-PCR 或逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，也可放-80℃長期保存。注：病毒提取的核酸量遠(yuǎn)不足以電泳檢測，提取后可通過 RT-PCR 檢測，最終靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/mL。

相關(guān)資料

常見人類疾病相關(guān) RNA 病毒病毒 疾病名稱 類型 長度(Kb) Measles virus measles ssRNA 4.5~85 Hepatitis A Virus hepatitis type A ssRNA 7.5 Poliomyelitis virus polio ssRNA 7.8 Rubella virus German measles ssRNA 7.9 Hepatitis C Virus hepatitis type C ssRNA 9.3~9.4 Human immunodeficien cy virus AIDS ssRNA 9.7 Dengue Virus dengue ssRNA 11 Yellow fever virus yellow fever . ssRNA 11 Rabies virus rabies ssRNA 11.9 Influenza A virus influenza ssRNA 13.5 Mumps virus mumps ssRNA 15.4 Ebola virus virus hemorrhagic fever ssRNA 19

疑難解答

Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA 或 DNA)為何很難？ A：原因一是量少。病毒顆粒中的 RNA 或 DNA 是作為遺傳物質(zhì)保存，每個(gè)病毒最多只攜帶幾個(gè)拷貝(而一個(gè)細(xì)胞中有上萬種 RNA 分子，每種 RNA 有很多拷貝)，同時(shí)其長度也十分有限(一般不到細(xì)胞基因組的萬分之一)，樣品中病毒數(shù)往往又不是很多，使得樣品中病毒核酸的絕對量往往比一個(gè)細(xì)胞中核酸的絕對量還少，所以操作中十分容易丟失。另外，由于得到的核酸絕對量很少，不能使用電泳和測 OD 檢測，只能通過 PCR 或 RT-PCR 檢測，而 PCR 或 RT-PCR 的條件又需要優(yōu)化，所以要確定提取是否成功十分不容易。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 柱式病毒 DNAOUT