產(chǎn)品說明：

Polybrene（聚凝胺，Hexadimethrine Bromide）是一種多聚陽離子聚合物，常用于哺乳動物細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，作用機(jī)理可能是通過中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進(jìn)吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑），常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細(xì)胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序，因?yàn)樾┝康腜olybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入Polybrene還能提高膜的親和性。

本產(chǎn)品為即用型溶液，粉末用0.9% NaCl配置成10mg/mL的溶液，并用0.22μM濾膜過濾除菌。使用時(shí)一般按1:1000-1：2000稀釋，依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同，具體查閱相關(guān)文獻(xiàn)。

注：Polybrene對某些細(xì)胞（如末端分化的神經(jīng)元，DC細(xì)胞）毒性較大，初次應(yīng)用建議先做毒性測試。

操作步驟(僅供參考，具體使用濃度請參考相關(guān)文獻(xiàn))

實(shí)驗(yàn)1：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染（Retroviral Infection）

1. 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備：取5mL生長培養(yǎng)基（5%血清）加入約含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細(xì)胞的100mm培養(yǎng)盤內(nèi)。孵育24h后，吸去培養(yǎng)液并用0.45μM濾器過濾。
2. 待感染細(xì)胞的培養(yǎng)：100mm培養(yǎng)盤內(nèi)加入10mL完全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度為5×10⁵/盤。
3. 病毒感染：細(xì)胞培養(yǎng)24h后，吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2mL病毒上清 （或?qū)⒉《驹合♂尩?mL）感染細(xì)胞，polybrene的終濃度為5μg-10μg/mL。37°C孵育3-6h。
4. 收集病毒顆粒：加入8mL完全培養(yǎng)基。感染3天后，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)2：轉(zhuǎn)染

1. 完全生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞密度約50%；
2. 孵育細(xì)胞18-24h后準(zhǔn)備DNA-培養(yǎng)基- Polybrene混合液，按如下操作制備混合液：①添加完全培養(yǎng)基（60mm培養(yǎng)皿2mL，100mm培養(yǎng)皿3mL），37°C預(yù)熱；②添加10ng~10µg質(zhì)粒輕輕混勻；③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/mL。輕輕混勻。以上每個(gè)成分需要按順序加入。
3. 去除培養(yǎng)基，在細(xì)胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液，在37°C孵育細(xì)胞6-20h。細(xì)胞培養(yǎng)的前6h內(nèi)約每1.5h輕柔混勻。

4. 去除DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15% DMSO in 1×HBSS）輕輕蓋住細(xì)胞（60mm培養(yǎng)皿3mL，100mm培養(yǎng)皿4mL）。每次加入溶液時(shí)用手輕晃培養(yǎng)盤10s，使得液體均勻分布。然后37°C孵育細(xì)胞4min。
5. 立即去除DMSO shock solution，用完全生長培養(yǎng)基輕輕清洗細(xì)胞2次。對于60mm培養(yǎng)皿每次用5mL培養(yǎng)液清洗，100mm培養(yǎng)皿每次用10mL培養(yǎng)液清洗。
6. 加入完全培養(yǎng)基到細(xì)胞中；
7. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化：去除生長培養(yǎng)基，按照1:5的比例用選擇培養(yǎng)基裂解細(xì)胞。

瞬時(shí)表達(dá)：去除生長培養(yǎng)基，加入新鮮的生長培養(yǎng)基。24-72h后收獲細(xì)胞。

 注意事項(xiàng)：

本產(chǎn)品僅用于科研，不可用于其他。

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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