BT-474 [BT474]人乳腺導管癌細胞（培養(yǎng)基：89%培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗）詳細說明書及細胞培養(yǎng)操作指南歡迎聯(lián)系我們。
發(fā)貨方式：復蘇后發(fā)貨：我們復蘇細胞后發(fā)貨，貨期一周左右，免運費。（氣溫較好建議復蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運輸）：需額外增加干冰運費，選擇干冰運輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細胞，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。
（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）細胞發(fā)貨采取專業(yè)的運輸包裝，并選擇最快捷的運輸方式（順豐速運或其他空運快遞）
本公司細胞引種來源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細胞庫、上海生化細胞所、中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會等
細胞處理方法：一、貼壁細胞
1、 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代，如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
6、如果肉眼檢查上清有細胞，對50ml上清進行離心收集細胞，如果細胞連片狀態(tài)，棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。
二、懸浮細胞
1、接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4、細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。
5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細胞）。
細胞培養(yǎng)操作：華拓細胞培養(yǎng)操作指南
細胞常見問題：細胞培養(yǎng)常見問題分析
細胞在發(fā)貨前進行質(zhì)檢：1、細胞存種的活性檢測
2、細菌、真菌、霉菌污染物鏡檢
3、衣原體、支原體檢測（熒光法、培養(yǎng)法等）
產(chǎn)品質(zhì)量保證及售后：1、 細胞為三代以內(nèi)，活體。運輸過程中細胞出現(xiàn)污染和狀態(tài)不好，我們完全免費重新發(fā)貨。
2、 實驗過程中若確定是客戶問題，客戶僅需支付物流和耗材費用，我們可重新發(fā)貨。其他根據(jù)情況靈活處理。
3、 產(chǎn)品使用過程中，華拓生物可提供技術上的指導。
細胞培養(yǎng)常見注意事項：1、收貨時，如不能在收到細胞后及時操作處理細胞，T25及離心管發(fā)貨的細胞可以消毒后在培養(yǎng)箱過夜，干冰發(fā)貨的可以在確認干冰未完全升華時將細胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升華，需即刻復蘇細胞；T25瓶及離心管發(fā)貨的細胞收貨后在37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上，再開始處理細胞，平衡是為了讓細胞盡快適應培養(yǎng)箱環(huán)境。
2、貼壁細胞在消化時，因為每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣，不能完全規(guī)定消化時間，以科研人員經(jīng)驗為準。 對于消化這步，如果對該細胞經(jīng)驗不多，無法準確掌控胰酶作用時間，建議可以按照下述操作：胰酶首先復溫到室溫后加入細胞，然后每隔30秒，即吹打下細胞，如果能夠吹打散細胞，加入完全培養(yǎng)基終止消化，把細胞打散后，離心去除胰酶加新的培養(yǎng)基重懸細胞接種 ，如果30秒吹打不下，再等30秒重復操作。注意消化時間，不要過度，細胞變圓可以吹下來即可終止。
3、傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代；傳代后，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基，會有大量細胞碎片甚至導致細胞死亡的風險；細胞狀態(tài)不好或者生長比較慢時，可以通過增加血清濃度調(diào)整細胞狀態(tài)及生長速度；細胞碎片較多、背景較臟時，貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善；建議不要隨意更換培養(yǎng)基，因?qū)嶒炐枰梢灾鸩今Z化，也可以聯(lián)系咨詢我們。
4、細胞凍存時，部分長得比較慢的細胞，凍存的細胞密度要稍微大點，以防止復蘇后生長困難；凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO，同時濃度不要太高，部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡，所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度；凍存時建議設置凍存檢測，即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中，與正常體積凍存的細胞共同凍存，至液氮后復蘇檢查凍存結(jié)果，凍檢合格前，留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng)，以防萬一；細胞凍存及復蘇遵循慢凍快融的原則，即凍存時溫度不能急劇下降，應控制溫度緩慢下降，復蘇時應快速融化，融化后盡快加入培養(yǎng)基中。