名稱 DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒 / DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit
規(guī)格 2×50mL | 2×100mL
保存 -20℃保存，一年有效。DAB顯色液A需避光保存。

試劑組分 
Component 2×50mL 2×100mL
DAB 顯色液 A 50mL 100mL
DAB 顯色液 B 50mL 100mL
說明書 1份 1份

產(chǎn)品簡介 

DAB 辣根過氧化物酶顯色試劑盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一種借助辣根 過氧化物酶(HRP)，用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或 Western、Southern、Northern、EMSA 等膜顯色的 試劑盒。

DAB，即 3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物 酶的催化下，DAB 會產(chǎn)生棕色沉淀。該棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在 DAB 顯色后，還可以使用溶于 乙醇的染料進行后續(xù)染色。

本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可以用于 Western 等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。


使用參考 

1. 對于組織切片或細(xì)胞樣品或膜，在與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當(dāng)洗滌 液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也用適 當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。

2. 按照1:1的比例將顯色液A、B液混勻，混勻后即配制成DAB染色工作液。

3. 最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量DAB染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可長達(dá)24小時)，直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除DAB染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對于組織切片或細(xì)胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存。


注意事項 

DAB 對人體有害，請注意適當(dāng)防護。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。


常見問題 


常見問題及可能原因： 

1、 背景顯色太深 

① 在免疫組化時如果背景顯色太深，考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。 
② 在進行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時，如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶?？梢栽?體積甲醇溶液中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。 
③可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛取?nbsp;
④ 選擇適當(dāng)強度的洗滌液，或延長洗滌時間。 


2、沒有顯色或顯色太弱 

①當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。 
②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。
③適當(dāng)延長顯色時間，另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。