產(chǎn)品簡(jiǎn)介
真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物，種屬很多，已報(bào)道的屬達(dá) 1 萬(wàn)以上，種超過(guò) 10 萬(wàn)個(gè)。真菌通常又分為三類(lèi)，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。對(duì)于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理，而對(duì)于大型真菌，可直接用液氮研磨。經(jīng)過(guò)前期處理的菌液，用硅質(zhì)膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化后的 DNA，可以直接用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品組分
操作步驟：
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1、樣品的處理：
1）對(duì)于酵母菌，取 1-2ml 培養(yǎng)好的菌液，離心收集，棄上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5-10min。
2）霉菌(孢子也可相同處理)：取 50-100mg 菌絲，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲，加入20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 30min。
3）大型真菌（如蘑菇等）：稱(chēng)取 50-100mg 樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重復(fù) 3 次，使樣品研成粉末（如無(wú)液氮，可加 200ul 溶液 A 后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨），加 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 100mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5min。
2、加入 20ul 的蛋白酶 K（10mg/ml），充分混勻，55℃水浴消化 30min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。12000rpm離心 2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀，可放 55℃水浴 5min，沉淀即會(huì)消失，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不徹底，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致上柱后堵柱子，請(qǐng)?jiān)黾酉瘯r(shí)間。
4、再加入 200ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置 2 分鐘。
5、12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。
9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5min，12000rpm 離心 1min。
10、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 2min，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。
注意事項(xiàng)：
1. 由于真菌種類(lèi)萬(wàn)千，對(duì)于一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩，蛋白酶 K 處理，一般都可以得到一定量的基因組 DNA，如電泳檢測(cè)很弱，一般 PCR 都會(huì)有較好結(jié)果。
2. 若溶液 A 或溶液 B 中有沉淀，可在 55℃水浴中重新溶解。
3. 如果 DNA 提取量很少，可加長(zhǎng)玻璃珠處理時(shí)間，如果提取 DNA 成彌散短條帶，可減少玻璃珠處理時(shí)間。
4. 洗脫緩沖液的體積不少于 50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率；洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍)，pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。
5. DNA 濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖