細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發(fā)育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調節(jié)作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。Caspase-4可以和Apaf-1相互作用,并參與細胞色素c導致的Caspase-3激活,也可以和caspase-14相互作用。試劑盒測定原理基于Caspase-4特異水解其多肽底物Ac-LEVD-pNA,釋放出游離的硝基苯胺pNA,后者呈黃色在405 nm具有吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-4的水解活性。反應體系100微升,試劑盒提供的試劑,除標準曲線外可進行50或100次樣品測定。 適用:測定哺乳動物組織、細胞caspase-4活性。 組成與儲存: 1. 裂解緩沖液: 20 ml ,4 oC 2. 反應緩沖液: 10 ml ,4 oC 3. 2 mM Ac-LEVD-pNA底物: 0.5 ml,-20 oC避光 4. 10 mM pNA標準品: 0.5 ml,-20 oC避光 以上標出的量為100次檢測,50次檢測的試劑量減半。試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內穩(wěn)定。 所需儀器: 酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。 工作波長:吸收波長405 nm,如不具備也可在400~450 nm范圍內測定。
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