名稱 NP-40裂解液 / NP-40 Lysis Buffer

規(guī)格 PH1421-100 | 100mL

存儲(chǔ) 冰袋運(yùn)輸，-20℃保存

有效期：至少12個(gè)月

試劑組份 

試劑A：NP-40 Lysis Buffer----100ml----Store at -20℃

試劑B：PMSF(100mM)----1.5ml----Store at -20℃

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

NP-40 Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40等組成。用本裂解液得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

NP-40裂解液 (NP-40 Lysis Buffer)是采用一種溫和的裂解方法獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于PAGE電泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。

使用說明 

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1.取NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。例如取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用 （PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。
2.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，用PBS、NS或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
3.按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15～30min，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
4.10000～12000g，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
5.進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1.取NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。
2.用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。
3.10000～12000g，4℃離心5～10min(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
4.進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

1.取NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。
2.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
3.按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30～60min。
4.步驟3、4亦可以采用如下過程：按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例，加入含有PMSF的NP-40 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。