巴斯德氏桿菌屬PCR試劑盒

Pasteurella spp. PCR Kit

產(chǎn)品及特點 

本產(chǎn)品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液，濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，可限度的減少人為誤差。使用時只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷，能避免PCR操作過程中的污染，使用時只需取適量2×TaqPCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去離子水補足體積，使MasterMix溶液濃度為1×即可進行反應(yīng)。使用前請保證充分溶解并混勻，操作需在冰上進行。

Taq：擴增效率最高的耐熱 DNA 聚合酶，其擴增速度約為 1-2kb/min。擴增堿基出錯率為 10-5 左右。其產(chǎn)物未端帶有 A，可直接用于 TA 克隆。

Pfu：目前保真度最高的耐熱 DNA 聚合酶，堿基出錯率為 10-6，但擴增效率低于 Taq 酶， 一般能很好的擴增 2kb 以下的片段。其擴增速度約為 500bp/min 左右。其產(chǎn)物為平未端，須加 A后才可用于 TA 克隆。

Taq Plus：Taq 和 Pfu 的等比混合物。集擴增效率高和保真度好于一身。擴增效率比 Pfu 高， 保真度比 Taq 好。其擴增速度約為 1000bp/min 左右。其產(chǎn)物未端帶有 A，可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反應(yīng)完后可以直接電泳檢測。不含染料的 PCR MasterMix 反應(yīng)完后 加入上樣緩沖液后電泳檢測。

它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增巴斯德氏桿菌屬，與其他微生物沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：樣品 DNA。

使用方法：

 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送20 次核酸釋放劑試用裝，其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 補骨脂 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。