產(chǎn) 品 說 明

中文名稱：5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯
英文名稱：5(6)-CFDA, SE
產(chǎn)品貨號：C-4037-1
產(chǎn)品規(guī)格：25 mg
應用范圍：熒光標記試劑

產(chǎn)品參數(shù)
外觀：可溶于DMSO的白色或淺黃色固體
λEx/λEm = 494/521 nm
貯存條件：4℃避光保存
保質(zhì)期：12個月
分子式：C29H19NO11
分子量：557.47
分子結(jié)構(gòu)圖：


產(chǎn)品介紹
5(6)-CFDA, SE是一種可對活細胞進行熒光標記
的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，
還可用于追蹤細胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。
5(6)-CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein
diacetate，F(xiàn)DA）的衍生物，具有細胞膜滲透性，
本身不具有熒光發(fā)光性。當通過被動運輸穿透細胞
膜進入活細胞后，可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基
熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein
succinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強烈的綠色熒光，
不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可
CFSE還可自發(fā)并不可逆地與細胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)
到細胞蛋白質(zhì)上，同時過量且未被偶聯(lián)的5(6)-CFDA,
SE通過被動擴散回到細胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟
所清除。經(jīng)5(6)-CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常
穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)月，因此非常適用于細胞群
落分析。
5(6)-CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前
使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的
子代細胞的熒光分配也很均一。在細胞分裂增殖過程中，
CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度
變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據(jù)
熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2
的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的
熒光強度），以及更多分裂次數(shù)的細胞。5(6)-CFDA, SE
可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。經(jīng)5(6)-CFDA, SE標
記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近
細胞染色的功能。5(6)-CFDA, SE最常用于淋巴細胞的增
殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖
細胞等其他細胞的增殖檢測。
5(6)-CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，除了流式細胞
儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目，
或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。

使用方法（針對活細胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實際情
況進行適當調(diào)整）
1、用DMSO制備1 mM的5(6)-CFDA, SE溶液。用PBS或
適當?shù)木彌_液將其稀釋成10～50 μM的5(6)-CFDA, SE溶液。
2、根據(jù)實驗要求，用適當藥物處理細胞。
3、離心收集細胞，調(diào)整細胞濃度為1～5×105個/管。
4、用500 μL的5(6)-CFDA, SE工作液懸浮細胞，于室溫
或37℃避光孵育10-30分鐘。
5、吸除5(6)-CFDA, SE 染液，用PBS或其他合適緩沖液清洗
細胞，用500 μL預熱PBS或培養(yǎng)液懸浮細胞。
6、用流式細胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細胞。

注意事項
1、熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減
緩熒光淬滅。
2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套
操作。

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