產(chǎn)品簡介 RNA高效保存液(RNAwait)是一種無毒的可直接使用的樣品儲(chǔ)存液,能使細(xì)胞內(nèi)的RNA與RNA酶分離,可以快速可靠地保存動(dòng)物組織、細(xì)胞內(nèi)的RNA。組織獲取后立即浸入RNAwait保存液中,在室溫可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃標(biāo)本可以長期保存,RNA穩(wěn)定存在不降解,取出后用各類方法抽提可以獲得高質(zhì)量的RNA。 保存條件:15–25°C,保質(zhì)期2年。低溫條件下有結(jié)晶析出時(shí)加熱至37°C溶解后使用。 操作流程 1.根據(jù)要保存的各樣本的體積,計(jì)算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍(100mg組織約用1ml RNAwait);離心收集2×107細(xì)胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是:量寧多勿少。 建議在實(shí)際操作中不要稱量組織,而直接根據(jù)目測(cè)結(jié)果加入RNAwait量,以加快操作和減少污染。例如5mm邊長的立方體組織塊,體積為125mm3=125μl,故應(yīng)當(dāng)加入1.25ml的RNAwait液。 2.將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中; 3. 快速將較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀,較小的組織直接取下,立即完全浸入RNAwait中。 注:組織的厚度一定要<0.5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入,組織中間部位的RNA不能受到保護(hù)。較大的組織可以切成厚度<0.5 cm的任意片狀后保存,較小的組織(如大鼠的腎臟、脾臟,小鼠的大部分器官)則可以直接浸入RNAwait。 4.保存時(shí)先將樣本浸入RNAwait后置4℃冰箱過夜(注:4℃過夜是必需的,這樣可使RNAwait完全滲入到組織中),然后轉(zhuǎn)移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃時(shí)可能為液態(tài),也可能為固態(tài),如有結(jié)晶析出,也是正常情況);或者在4℃冰箱過夜后,直接轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的標(biāo)本,反復(fù)凍融至室溫20次不影響RNA的質(zhì)量。 注意事項(xiàng) 1. 組織和細(xì)胞取材速度要快,在獲取后應(yīng)當(dāng)盡快浸入RNAwait,以防止RNA降解。 2. 冰凍組織不能用RNAwait保存,因?yàn)镽NAwait不能有效滲入冰凍組織。 3.保存樣品的RNA提?。簶颖緩?20℃或-80℃冰箱取出后,復(fù)溫到室溫后,取出組織塊,再用于提取RNA。細(xì)胞樣本則復(fù)溫后低速離心收集細(xì)胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后繼的處理(如組織勻漿)可以在室溫下進(jìn)行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保護(hù)。殘留少量RNAwait保存液不影響后繼提取RNA的質(zhì)量。 4. RNAwait在動(dòng)物組織(如大鼠肝臟,脾臟)和細(xì)胞(如DH5α)RNA的保護(hù)中效果不錯(cuò);植物材料種類繁多,沒能一一測(cè)試(煙草和擬南芥葉片中的RNA能被RNAwait有效保護(hù)),建議預(yù)實(shí)驗(yàn)后再使用
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