特別提示:包括2×SYBR Green PCR Mastermix在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱(chēng):2×SYBR Green PCR Mastermix
產(chǎn)品貨號(hào):QN0949
產(chǎn)品規(guī)格:50T|200T
本產(chǎn)品為應(yīng)用SYBR Green Ⅰ染料進(jìn)行Realtime PCR擴(kuò)增反應(yīng)的高效預(yù)混系統(tǒng)。該預(yù)混系統(tǒng)提供了經(jīng)過(guò)優(yōu) 化的緩沖液、dNTP、HotStart Taq DNA 聚合酶、SYBR Green I染料和MgCl2,使用者只需加入適量的引物、 模板和水,即可進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。 該預(yù)混系統(tǒng)中的優(yōu)化緩沖液和 HotStart Taq DNA 聚合酶等可大大提高 PCR 產(chǎn)物的靈敏度和特異性。 Realtime PCR MasterMix 采用高效 HotStart Taq DNA 聚合酶,使 PCR 反應(yīng)具有更高靈敏度和特異性。 本產(chǎn)品可用于熒光 PCR 檢測(cè),獲得靈敏、準(zhǔn)確且可靠的結(jié)果??蛇m合任意熒光定量 PCR 儀,如 ABI7000/7700/7900HT/7300/7500 Realtime PCR System、FTC2000、lightcycler 等。
產(chǎn)品特點(diǎn):
高特異性:本產(chǎn)品采用熱啟動(dòng) DNA 聚合酶,90℃以上2min后具有擴(kuò)增活性,可大大提高PCR產(chǎn)物的特異性。
高靈敏度:本產(chǎn)品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測(cè)低拷貝數(shù)的模板,且重復(fù)性好。
高適用性:本產(chǎn)品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。
應(yīng)用實(shí)例:模版:提取RNA,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,模版稀釋倍數(shù)102﹑103﹑104﹑105,設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增的目的片段長(zhǎng)度是125bp。
儲(chǔ)存條件:-20℃
除了2×SYBR Green PCR Mastermix,,我公司還供應(yīng)以下相關(guān)產(chǎn)品:
名稱(chēng):即用型熒光定量RT-PCR試劑盒
貨號(hào):BTN101219
規(guī)格:50次
本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測(cè)的即用型雙酶一管式RT-PCR試劑盒,可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。產(chǎn)品含有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液組分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料DNAgreen等所有一管式實(shí)時(shí)定量RT-PCR所需要的成分,用戶(hù)只需加入RNA模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR反應(yīng),具有廣泛的用途。
產(chǎn)品特點(diǎn):1.一管式完成qRT-PCR反應(yīng),避免樣品交叉污染,尤其適合臨床應(yīng)用。
2. 即開(kāi)即用,用戶(hù)不需要單獨(dú)準(zhǔn)備qRT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個(gè)(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix),將加樣步驟減少到zuì低,極大降低了加樣誤差,增加了可重復(fù)性。
4. 使用范圍廣,適用于從病毒RNA到人RNA的各種RNA模板。
5.高靈敏度,每個(gè)RT-PCR體系z(mì)uì低可以檢測(cè)200拷貝的RNA分子,可擴(kuò)增的模版RNA的zuì長(zhǎng)達(dá)2000nt。
試劑盒組成: 成分 | 規(guī)格 |
雙酶一管式qRT-PCR Buffer,2× | 750μl |
MMLV-Taq Mix | 100μl |
RNase-free水 | 1ml |
說(shuō)明書(shū) | 1份 |
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。
使用方法:1.在一干凈的無(wú)RNase的PCR管中,先加入下列成分(下面只列出樣品管的設(shè)置情況,用戶(hù)可自己根據(jù)需要設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照):
成分 | 樣品 |
自備RNA模板(分下面三種情況) | 見(jiàn)下 |
總RNA | 100-500ng |
或poly(A)mRNA | 10-500ng |
或體外轉(zhuǎn)錄得到的專(zhuān)一RNA | 0.01pg-500ng |
RNA特異性引物一(自備) | 終濃度300nM(注1) |
RNA特異性引物二(自備) | 終濃度300nM |
RNase-free水 | 補(bǔ)到10μL |
雙酶一管式qRT-PCR Buffer(2×) | 15μl |
自備ROX(某些熒光PCR機(jī)型需要) | 3μL(注2) |
MMLV-Taq Mix | 2μl |
?注1:通常初次使用本試劑時(shí),可用引物濃度300nM進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體情況,在200~800nM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶(hù)可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整,同時(shí)增減RNase-free水用量,保證總反應(yīng)體積不變即可。
?注2:如果使用ABI公司的7500,7700和7900三種型號(hào)的熒光PCR儀器,則需用自備的ROX進(jìn)行Ct值校正。對(duì)ABI 7700和7900,ROX的zuì佳濃度為1×(即在每30μl反應(yīng)體系中加3μl 10×ROX)。對(duì)ABI 7500,ROX的zuì佳濃度為0.05-0.1×(每30μL反應(yīng)體系加0.3μL 10×ROX;也可將10×ROX稀釋到1×,然后每個(gè)反應(yīng)體系加入3μL 1×ROX)。ROX會(huì)在溶解曲線(xiàn)中產(chǎn)生噪音,因此,如果出現(xiàn)了雜峰,將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項(xiàng)取消打勾,然后重新分析數(shù)據(jù)。對(duì)于iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000,RotorGene3000,RotorGene 6000和LightCycler 480等型號(hào)的熒光PCR儀器,ROX不是必須的,但加入的話(huà)也不會(huì)影響整個(gè)PCR分析。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR儀中進(jìn)行熒光定量RT-PCR。
3. 設(shè)定RT-PCR反應(yīng)條件時(shí),一般將RT的條件設(shè)定成42℃ 30分鐘,后接94℃變性5分鐘,然后進(jìn)入PCR循環(huán)(PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm值和PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度由用戶(hù)自行決定注)、zuì后72℃ 5分鐘。并在退火或延長(zhǎng)步驟中記錄熒光信號(hào)。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒(méi)結(jié)合DNA時(shí),zuì大吸收光譜在471nm,結(jié)合DNA時(shí)的zuì大吸收光譜在500nm,zuì大發(fā)射光譜在530nm。
溫馨提示:不可用于臨床治療。