??????碧云天的Human IL-4 ELISA Kit (Human Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為7.8pg/ml，與人IL-4 Sr，小鼠IL-4等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-4即白細(xì)胞介素-4(簡稱白介4)，是一種多功能細(xì)胞因子，主要由活化的T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生。IL-4因為糖基化的不同，分子量從15-19kDa不等。在不同類型的細(xì)胞中，IL-4參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的免疫應(yīng)答功能。IL-4參與B細(xì)胞的激活過程，它能誘導(dǎo)處于靜息期的B細(xì)胞上Ⅱ型MHC(主要組織相容復(fù)合體)分子的表達(dá)，增強(qiáng)IgE與IgG的表達(dá)和分泌，還能調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞上對IgE低親和FC受體的表達(dá)。IL-4也是前體輔助T細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化的重要調(diào)節(jié)因子。此外，IL-4在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性，IL-4在機(jī)體中的遺傳變異可導(dǎo)致缺血性中風(fēng)，腦血管意外或腦梗塞等疾病。
??????人IL-4前體蛋白(包含153個氨基酸)剪切掉24個氨基酸的信號肽后得到成熟的人IL-4。成熟的人IL-4與小鼠IL-4具有50%的氨基酸同源性，兩個物種的IL-4不存在交叉反應(yīng)性。同時人IL-4與人IL-13具有大約30%的氨基酸同源性，并且具有部分重疊的生物學(xué)活性。
??????特定細(xì)胞表面的受體復(fù)合物參與調(diào)節(jié)IL-4生物學(xué)功能。IL-4的受體主要有兩種類型，種類型的IL-4功能受體復(fù)合物由IL-4結(jié)合亞基(IL-4 R)和特定的γ_c鏈組成，該γ_c鏈同時也是IL-2,IL-7,IL-9和IL-15受體復(fù)合物的組成部分。第二種類型的IL-4功能受體復(fù)合物是由IL-4 R和IL-13 Rα組成，盡管IL-4 R并不直接與IL-13結(jié)合，但當(dāng)其與IL-13 R α形成復(fù)合物后，該復(fù)合物同時也對IL-13具有很高的親和力。此外，除了細(xì)胞膜表面的IL-4受體，在人及小鼠的體液和小鼠細(xì)胞培養(yǎng)上清液中均檢測到了游離IL-4受體的存在。
??????IL-4先與IL-4 Rα結(jié)合形成IL-4/IL-4 Rα復(fù)合物，該復(fù)合物隨后再與輔助受體鏈γ_c或IL-13 R 結(jié)合。當(dāng)IL-4與受體結(jié)合后，依靠胰島素受體底物IRS2和Shc蛋白激活Ras/MEK/Erk通路，實現(xiàn)促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的作用。此外，IL-4與IL-4 Rα的結(jié)合還能夠誘導(dǎo)JAK及STAT的磷酸化，磷酸化后的STAT形成二聚體進(jìn)入細(xì)胞核，對靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，同時磷酸化后的JAK還能夠?qū)崿F(xiàn)對PL3K/AKT通路的激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IL-4的濃度，其原理見圖1。人IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的人IL-4會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-4抗體后，生物素化抗人IL-4抗體與人IL-4結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人IL-4濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人IL-4濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。
注意事項：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。