??????Ad-GFP-LC3B， 即adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein，是一種可以表達GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染細(xì)胞或組織后進行細(xì)胞自噬(autophagy)的檢測。
??????LC3是酵母自噬關(guān)鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3最初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究最為廣泛。到目前為止，
LC3B被認(rèn)為是細(xì)胞自噬信號通路最為關(guān)鍵的標(biāo)志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的甘氨酸，人們把它命名為胞質(zhì)形式的LC3B I。在細(xì)胞自噬的過程中，其C端暴露的甘氨酸經(jīng)過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶(E1-like activating enzyme)， 以ATG3為E2樣連接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16復(fù)合物為E3樣連接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質(zhì)定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體
(autophagosome)的內(nèi)膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內(nèi)膜上的LC3B II則被溶酶體內(nèi)的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其極強的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染細(xì)胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點的形式表現(xiàn)出來(LC3B dots or punctae)。
??????自噬(Autophagy)是一種在進化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細(xì)胞內(nèi)分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關(guān)，在饑餓等不利的環(huán)境條件下， 細(xì)胞通過自噬降解多余或異常的細(xì)胞內(nèi)組分，為細(xì)胞的生存提供能量及原材料，促進生物體的生長發(fā)育、細(xì)胞分化及對環(huán)境變化產(chǎn)生應(yīng)答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關(guān)系。由于細(xì)胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經(jīng)成為細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的一個新的研究熱點。
??????Ad-GFP-LC3B是碧云天自行研發(fā)的重組腺病毒，感染后能夠在靶細(xì)胞中有效表達綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的綠色熒光，可以用于細(xì)胞自噬的檢測。
??????腺病毒感染細(xì)胞后為瞬時表達，通常不會與基因組DNA重組，不能用于篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。本產(chǎn)品感染體內(nèi)外細(xì)胞后，有效表達時間通常不少于7天，不同細(xì)胞和組織的有效表達時間有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表達很可能會大大減弱。
??????碧云天的Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重組腺病毒載體系統(tǒng)，感染普通的細(xì)胞后不能進行擴增和重組，從而可以有效降低本產(chǎn)品在活體生物中的風(fēng)險。
??????本產(chǎn)品可以在表達E1的HEK293A、HEK293等適當(dāng)細(xì)胞中擴增。
??????本產(chǎn)品的滴度≥1×10⁸?pfu/ml，使用時可以按照10⁸pfu/ml進行計算。如果按照20 MOI感染6孔板的細(xì)胞，每孔50萬細(xì)胞計算，每毫升本產(chǎn)品共可以感染10個孔；如果按照20 MOI感染24孔板的細(xì)胞，每孔10萬細(xì)胞計算，每毫升本產(chǎn)品共可以感染50個孔。如果MOI值提高，則相應(yīng)可以感染的孔數(shù)會減少；如果MOI值降低，則相應(yīng)可以感染的孔數(shù)會增加。
包裝清單：

保存條件：
??????-80℃保存，一年有效。-20℃保存，1-2個月內(nèi)有效。4℃保存，一周內(nèi)有效。
注意事項：
??????反復(fù)凍融會降低病毒滴度，如有必要請在收到本產(chǎn)品后分裝保存。病毒融解后，如果在一周內(nèi)使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存時間超過一年，可能會導(dǎo)致滴度下降，此時建議重新測定病毒滴度。
??????腺病毒感染需要細(xì)胞表面的CAR受體，請確認(rèn)擬使用的細(xì)胞或組織可以被腺病毒感染。
??????本產(chǎn)品使用前請仔細(xì)閱讀附錄1《腺病毒使用安全規(guī)范》。本產(chǎn)品生物安全等級為Biosafety Level 1 (BSL-1)，沒有確鑿證據(jù)顯示會導(dǎo)致健康成人產(chǎn)生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults)，可以按照常規(guī)的微生物實驗操作要求進行操作(Standard microbiological practices)。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。