??????Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用藻紅蛋白(Phycoerythrin, 簡(jiǎn)稱PE)標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
??????本試劑盒檢測(cè)的是紅色熒光，因此在待檢測(cè)的細(xì)胞已經(jīng)表達(dá)GFP等綠色熒光蛋白的情況下，特別適合使用本試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡。PE可以被495nm、545或564nm的激發(fā)光所激發(fā)，發(fā)出峰值為575nm的熒光。(參考圖1)

圖1.Phycoerythrin的熒光光譜

??????Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin?V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性。
??????Annexin?V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡(jiǎn)稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會(huì)把磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin?V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。對(duì)于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-PE可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)紅色熒光。
??????用帶有紅色熒光的熒光探針PE標(biāo)記的Annexin?V，即Annexin?V-PE，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡(jiǎn)單而直接地檢測(cè)到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。
??????正常細(xì)胞不會(huì)被Annexin?V-PE所染色，凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞都會(huì)被Annexin?V-PE所染色。如果希望進(jìn)一步區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞，可以使用其它細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(如C1062 Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒)進(jìn)行檢測(cè)。使用本試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡的效果參考圖2。

圖2. Annexin V-PE的染色效果圖。圖中紅色熒光為Annexin V-PE染色陽(yáng)性細(xì)胞，藍(lán)色熒光為Hoechst 33342標(biāo)記的所有細(xì)胞的細(xì)胞核。Vehicle組為陰性對(duì)照，Annexin V-PE染色非常弱，L-929細(xì)胞處于正常狀態(tài)；TSZ組為陽(yáng)性對(duì)照，L-929細(xì)胞用TSZ處理4小時(shí)。TSZ為TNFα、SM-164和Z-VAD-FMK組成的細(xì)胞壞死誘導(dǎo)試劑(C1058)。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測(cè)條件，實(shí)際獲得的結(jié)果可能有較明顯的差別。
??????本試劑盒小包裝C1065S可以檢測(cè)20個(gè)樣品，中包裝C1065M可以檢測(cè)50個(gè)樣品，大包裝C1065L可以檢測(cè)100個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
??????4℃保存，半年有效。-20℃保存，一年有效。AnnexinV-PE需避光保存。
注意事項(xiàng)：
??????盡管經(jīng)測(cè)試AnnexinV-PE反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
??????如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
??????染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
??????如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-PE，最終導(dǎo)致染色失敗。
??????由于細(xì)胞樣品的差異、凋亡和壞死程度的差異，可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)化Annexin V-PE的使用量，進(jìn)行適當(dāng)增加或減少。
??????熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
??????需自備PBS。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。