??????Enhanced Cell Counting Kit-8,簡(jiǎn)稱增強(qiáng)型CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)的試劑盒,比普通的CCK-8試劑盒具有更好的檢測(cè)靈敏度和更寬的線性范圍。 ??????WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan(參考圖1)。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。
圖1. WST-8檢測(cè)原理圖 (EC=electron coupling reagent,即電子耦合試劑)
??????WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品,和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先,MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液來(lái)溶解;而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次,WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定,使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬,靈敏度更高。 ??????WST-8和WST-1相比,檢測(cè)靈敏度更高,更易溶解,并且更加穩(wěn)定。 ??????本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測(cè),也可以用于抗癌藥物等對(duì)細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測(cè),或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)。 ??????本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的增強(qiáng)型CCK-8溶液,無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作。無(wú)須使用同位素,所有的檢測(cè)步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞,不必收集細(xì)胞,也不必采用額外的步驟去溶解formazan??梢杂糜诖笈繕悠返臋z測(cè)。 ??????酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。 ??????WST-8對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。加入增強(qiáng)型CCK-8溶液顯色后,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板,使檢測(cè)時(shí)間更加靈活,便于找到測(cè)定時(shí)間。 ??????碧云天各種細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒的比較和選擇,請(qǐng)參考http://www.beyotime.com/cell-proliferation.htm。 ??????本試劑盒可以測(cè)定100個(gè)樣品。 包裝清單:
保存條件: ??????4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存兩年有效。 注意事項(xiàng): ??????由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè),如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),一定要注意蒸發(fā)問(wèn)題。一方面,由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā),可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加相同量的PBS、水或培養(yǎng)液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方,以緩解蒸發(fā)。 ??????本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng),所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會(huì)干擾檢測(cè),如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑,需設(shè)法去除。 ??????用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡,否則會(huì)干擾測(cè)定。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。?
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