??????Fluo-3?AM是最常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為C51H50Cl2N2O23,分子量為1129.85。 ??????Fluo-3和Fura-2相比,其優(yōu)點是:一方面可以被氬離子激光(argon-ion?laser)的488nm激發(fā)光激發(fā),便于檢測;另一方面,F(xiàn)luo-3和鈣離子結(jié)合后熒光變化更強,即對鈣離子濃度變化的檢測更加靈敏;同時,F(xiàn)luo-3和鈣離子的結(jié)合能力較弱,這樣可以比Fura-2檢測到細胞內(nèi)更高濃度的鈣離子水平;此外,對于細胞內(nèi)的鈣離子的即時變化反應得更加準確,減小了因為和鈣離子解離速度慢而導致的熒光變化滯后。 ??????本Fluo-3 AM (鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO (anhydrous DMSO)中的儲存液,濃度為5mM。 ??????Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合,結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光,激發(fā)波長為506nm,發(fā)射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右,發(fā)射波長為525-530nm。Fluo-3的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。
??????用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時,F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM適當溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進行熒光探針裝載,隨后適當洗滌,洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內(nèi)完全轉(zhuǎn)變成Fluo-3。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃避光保存,6個月有效。 注意事項: ??????本Fluo-3?AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。 ??????熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。 ? ? ? 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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