| 產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品包裝 |
產(chǎn)品價格 |
| D2802 |
pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽性對照質(zhì)粒) |
1μg |
888.00元 |
??????pFastBac1-EGFP是以pFastBac1為基礎(chǔ)構(gòu)建的用于在昆蟲細胞表達EGFP的質(zhì)粒。在polyhedrin (PH)啟動子的作用下，可以高效啟動EGFP在昆蟲細胞(如Sf9和Sf21等)中的表達。
??????在采用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)表達目的蛋白時，pFastBac1-EGFP可以用作監(jiān)測轉(zhuǎn)染、病毒包裝和目的蛋白表達效果的對照質(zhì)粒。表達的EGFP有很強的綠色熒光，在熒光顯微鏡下可以非常方便地觀察轉(zhuǎn)染、病毒包裝和表達的效果。
??????pFastBac1是基于Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而設(shè)計的表達載體。Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)是由Luckow等人于1993年發(fā)展的一種快速而有效產(chǎn)生重組桿狀病毒的方法。該系統(tǒng)主要包括以下兩個組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因如EGFP等插入后受桿狀病毒特異性啟動子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin啟動子調(diào)控表達；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質(zhì)粒(helper plasmid，用于表達轉(zhuǎn)座必須的轉(zhuǎn)座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。將pfastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化該菌株可發(fā)生pfastBac重組質(zhì)粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發(fā)生轉(zhuǎn)座，從而形成重組的bacmid。位點特異的轉(zhuǎn)座會破壞宿主的lacZα基因，從而可通過藍白斑篩選重組克隆。PCR等方法鑒定重組克隆后，提取重組的bacmid轉(zhuǎn)染昆蟲細胞，可以產(chǎn)生重組桿狀病毒，并表達目的蛋白如EGFP等。擴增重組的桿狀病毒并感染昆蟲細胞，就可以大量表達純化目的蛋白了。
??????pFastBac1-EGFP質(zhì)粒的主要信息如下：
|
Feature Nucleotide
|
Position
|
|
f1 origin
|
2-457
|
|
Ampicillin resistance gene
|
589-1449
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pUC origin
|
1594-2267
|
|
Tn 7R
|
2511-2735
|
|
Gentamicin resistance gene
|
2802-3335
|
|
Polyhedrin promoter (PPH)
|
3904-4032
|
|
EGFP
|
4038-4757
|
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SV40 polyadenylation signal
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4794-5021
|
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Tn 7L
|
5050-5215
|
??????pFastBac1-EGFP質(zhì)粒(5397bp)的圖譜如下：
??????pFastBac1-EGFP的詳細圖譜如下：
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BamHI EGFP
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4031
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GTGAGCAAGG
|
GCGAGGAGCT
|
GTTCACCGGG
|
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|
CACTCGTTCC
|
CGCTCCTCGA
|
CAAGTGGCCC
|
|
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4081
|
TCCTGGTCGA
|
GCTGGACGGC
|
GACGTAAACG
|
GCCACAAGTT
|
|
|
|
AGGACCAGCT
|
CGACCTGCCG
|
CTGCATTTGC
|
CGGTGTTCAA
|
|
|
|
|
4131
|
GGCGAGGGCG
|
AGGGCGATGC
|
CACCTACGGC
|
AAGCTGACCC
|
|
|
|
CCGCTCCCGC
|
TCCCGCTACG
|
GTGGATGCCG
|
TTCGACTGGG
|
|
|
|
|
4181
|
CTGCACCACC
|
GGCAAGCTGC
|
CCGTGCCCTG
|
GCCCACCCTC
|
|
|
|
GACGTGGTGG
|
CCGTTCGACG
|
GGCACGGGAC
|
CGGGTGGGAG
|
|
|
|
|
4231
|
TGACCTACGG
|
CGTGCAGTGC
|
TTCAGCCGCT
|
ACCCCGACCA
|
|
|
|
ACTGGATGCC
|
GCACGTCACG
|
AAGTCGGCGA
|
TGGGGCTGGT
|
|
|
|
|
4281
|
CACGACTTCT
|
TCAAGTCCGC
|
CATGCCCGAA
|
GGCTACGTCC
|
|
|
|
GTGCTGAAGA
|
AGTTCAGGCG
|
GTACGGGCTT
|
CCGATGCAGG
|
|
|
|
|
4331
|
CATCTTCTTC
|
AAGGACGACG
|
GCAACTACAA
|
GACCCGCGCC
|
|
|
|
GTAGAAGAAG
|
TTCCTGCTGC
|
CGTTGATGTT
|
CTGGGCGCGG
|
|
|
|
|
4381
|
TCGAGGGCGA
|
CACCCTGGTG
|
AACCGCATCG
|
AGCTGAAGGG
|
|
|
|
AGCTCCCGCT
|
GTGGGACCAC
|
TTGGCGTAGC
|
TCGACTTCCC
|
|
|
|
|
4431
|
AAGGAGGACG
|
GCAACATCCT
|
GGGGCACAAG
|
CTGGAGTACA
|
|
|
|
TTCCTCCTGC
|
CGTTGTAGGA
|
CCCCGTGTTC
|
GACCTCATGT
|
|
|
|
|
4481
|
CCACAACGTC
|
TATATCATGG
|
CCGACAAGCA
|
GAAGAACGGC
|
|
|
|
GGTGTTGCAG
|
ATATAGTACC
|
GGCTGTTCGT
|
CTTCTTGCCG
|
|
|
|
|
4531
|
ACTTCAAGAT
|
CCGCCACAAC
|
ATCGAGGACG
|
GCAGCGTGCA
|
|
|
|
TGAAGTTCTA
|
GGCGGTGTTG
|
TAGCTCCTGC
|
CGTCGCACGT
|
|
|
|
|
4581
|
CACTACCAGC
|
AGAACACCCC
|
CATCGGCGAC
|
GGCCCCGTGC
|
|
|
|
GTGATGGTCG
|
TCTTGTGGGG
|
GTAGCCGCTG
|
CCGGGGCACG
|
|
|
|
|
4631
|
CAACCACTAC
|
CTGAGCACCC
|
AGTCCGCCCT
|
GAGCAAAGAC
|
|
|
|
GTTGGTGATG
|
GACTCGTGGG
|
TCAGGCGGGA
|
CTCGTTTCTG
|
|
|
|
|
4681
|
AGCGCGATCA
|
CATGGTCCTG
|
CTGGAGTTCG
|
TGACCGCCGC
|
|
|
|
TCGCGCTAGT
|
GTACCAGGAC
|
GACCTCAAGC
|
ACTGGCGGCG
|
|
|
|
HindIII
|
|
4731
|
CTCGGCATGG
|
ACGAGCTGTA
|
|
CTTGTCGAGA
|
AGTACTAGAG
|
|
|
GAGCCGTACC
|
TGCTCGACAT
|
|
GAACAGCTCT
|
TCATGATCTC
|
??????pFastBac1-EGFP中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：
|
AatII
|
Acc65I
|
AfeI
|
AflII
|
AgeI
|
ApaI
|
AscI
|
|
AsiSI
|
BbvCI
|
BfuAI
|
BlpI
|
BmgBI
|
BmtI
|
BsiWI
|
|
BspDI
|
BspMI
|
BssHII
|
BstAPI
|
BstBI
|
BstEII
|
Bsu36I
|
|
ClaI
|
CspCI
|
Eco53kI
|
EcoNI
|
EcoO109I
|
EcoRI
|
FseI
|
|
KasI
|
KpnI
|
MluI
|
NarI
|
NdeI
|
NheI
|
NotI
|
|
NruI
|
NsiI
|
PacI
|
PaeR7I
|
PflMI
|
PluTI
|
PmeI
|
|
PmlI
|
PpuMI
|
PshAI
|
PspOMI
|
PspXI
|
PstI
|
PvuII
|
|
RsrII
|
SacI
|
SalI
|
SbfI
|
SexAI
|
SfiI
|
SfoI
|
|
SgrAI
|
SmaI
|
SpeI
|
SphI
|
SrfI
|
StuI
|
SwaI
|
|
TspMI
|
XbaI
|
XcmI
|
XhoI
|
XmaI
|
ZraI
|
??????pFastBac1-EGFP中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：
|
NgoMIV
|
G`CCGG,C
|
127
|
|
BsmBI
|
CGTCTCN`NNNN,
|
3182
|
|
NaeI
|
GCC|GGC
|
129
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
3228
|
|
BanII
|
G,RGCY`C
|
157
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
3228
|
|
BsaHI
|
GR`CG,YC
|
836
|
|
BbsI
|
GAAGACNN`NNNN,
|
3757
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
1005
|
|
SnaBI
|
TAC|GTA
|
3881
|
|
FspI
|
TGC|GCA
|
1153
|
|
AccI
|
GT`MK,AC
|
3883
|
|
AlwNI
|
CAG,NNN`CTG
|
1852
|
|
BstZ17I
|
GTA|TAC
|
3884
|
|
BseYI
|
C`CCAG,C
|
1960
|
|
BsmFI
|
GGGAC(N)10`NNNN,
|
4000
|
|
TfiI
|
G`AWT,C
|
2290
|
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
4032
|
|
SapI
|
GCTCTTCN`NNN,
|
2381
|
|
NcoI
|
C`CATG,G
|
4036
|
|
BspQI
|
GCTCTTCN`NNN,
|
2381
|
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
4758
|
|
MscI
|
TGG|CCA
|
2709
|
|
MfeI
|
C`AATT,G
|
4873
|
|
BstXI
|
CCAN,NNNN`NTGG
|
2713
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
4886
|
|
SacII
|
CC,GC`GG
|
2766
|
|
BclI
|
T`GATC,
|
5022
|
|
BaeI
|
,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5`
|
2798
|
|
AvrII
|
C`CTAG,G
|
5037
|
|
EcoRV
|
GAT,ATC
|
2825
|
|
|
|
??????pFastBac1-EGFP的全序列信息請參考碧云天的網(wǎng)站上該質(zhì)粒的信息。
??????pFastBac1-EGFP質(zhì)粒使用碧云天研發(fā)的LipoInsect?轉(zhuǎn)染試劑(C0551)轉(zhuǎn)染SF9細胞的效果參考圖1。
??????圖1. pFastBac1-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac，獲得的重組bacmid用碧云天生產(chǎn)的LipoInsect?轉(zhuǎn)染試劑(C0551)轉(zhuǎn)染SF9細胞4天后的效果圖。左側(cè)為明場照片，右側(cè)為熒光照片。
??????關(guān)于昆蟲細胞系統(tǒng)的蛋白表達與純化的詳細介紹，請見如下網(wǎng)頁： http://www.beyotime.com/support/insect cell.htm。
包裝清單：
|
產(chǎn)品編號
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
|
D2802
|
pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽性對照質(zhì)粒)
|
1μg
|
|
—
|
說明書
|
1份
|
保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。