??????碧云天的Rat IFN-γ ELISA Kit (Rat Interferon-γ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠干擾素-γ酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IFN-γ的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為29pg/ml，與大鼠GDNF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、PDGF-BB、IL-10，人IFN-γ，小鼠IFN-γ沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IFN-γ即干擾素-γ，也稱(chēng)之為II型干擾素，是細(xì)胞因子超家族中IFN家族的重要成員，具有廣泛的生物學(xué)功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)控細(xì)胞增殖和分化等。在許多細(xì)胞中，IFN-γ可以誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生及對(duì)多種膜蛋白(包括MHC class I、MHC class II、Fc受體、細(xì)胞粘附分子、B7家族抗原)表達(dá)的上調(diào)，IFN-γ同時(shí)也是巨噬細(xì)胞效應(yīng)強(qiáng)有力的催化劑。IFN-γ引導(dǎo)B細(xì)胞的合成、類(lèi)別轉(zhuǎn)換及免疫球蛋白的分泌。IFN-γ通過(guò)抑制Th2細(xì)胞的分化和刺激Th1細(xì)胞的發(fā)育影響輔助性T細(xì)胞表型的發(fā)育。IFN-γ在諸如自身免疫和動(dòng)脈粥樣硬化這樣的炎性疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。
??????具有生物活性的IFN-γ是由2個(gè)20-25kDa糖基化亞基以非共價(jià)鍵連接構(gòu)成的同源二聚體。成熟大鼠的IFN-γ與小鼠的IFN-γ氨基酸同源性為86%，與牛、犬、棉鼠、馬、貓科動(dòng)物、豬、人和獼猴的氨基酸同源性為37-45%。IFN-γ首先與跨膜IFN-γ RI (α亞基)結(jié)合，然后與跨膜IFN-γ RII (β亞基)作用形成由2個(gè)α亞基和2個(gè)β亞基構(gòu)成的功能性受體復(fù)合物。受體復(fù)合物中的IFN-γ RII能夠增強(qiáng)配體結(jié)合親和力及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
??????在炎癥狀態(tài)下很多細(xì)胞都能產(chǎn)生IFN-γ，包括樹(shù)突狀表皮細(xì)胞/γδ T細(xì)胞、角化細(xì)胞、外周血γδ T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、CD8⁺ T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD4⁺ T細(xì)胞和睪丸精子。
??????IFN-γ與受體結(jié)合后激活JAK1和JAK2，活化后的JAKs協(xié)助IFN-γ R與STAT1結(jié)合，在JAKs的作用下STAT1發(fā)生磷酸化并形成同源二聚體，隨后該聚合物進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)。SOCS能夠通過(guò)抑制JAK和STAT的磷酸化從而抑制IFN-γ的信號(hào)傳遞，影響其功能。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中大鼠IFN-γ的濃度，其原理見(jiàn)圖1。大鼠IFN-γ特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的大鼠IFN-γ會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠IFN-γ抗體后，生物素化抗大鼠IFN-γ抗體與大鼠IFN-γ結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。大鼠IFN-γ濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中IFN-γ濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
??????TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
??????加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。