??????碧云天的Rat IFN-γ ELISA Kit (Rat Interferon-γ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠干擾素-γ酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿、細胞或細胞培養(yǎng)上清液中的IFN-γ的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為29pg/ml，與大鼠GDNF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、PDGF-BB、IL-10，人IFN-γ，小鼠IFN-γ沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IFN-γ即干擾素-γ，也稱之為II型干擾素，是細胞因子超家族中IFN家族的重要成員，具有廣泛的生物學(xué)功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)控細胞增殖和分化等。在許多細胞中，IFN-γ可以誘導(dǎo)細胞因子的產(chǎn)生及對多種膜蛋白(包括MHC class I、MHC class II、Fc受體、細胞粘附分子、B7家族抗原)表達的上調(diào)，IFN-γ同時也是巨噬細胞效應(yīng)強有力的催化劑。IFN-γ引導(dǎo)B細胞的合成、類別轉(zhuǎn)換及免疫球蛋白的分泌。IFN-γ通過抑制Th2細胞的分化和刺激Th1細胞的發(fā)育影響輔助性T細胞表型的發(fā)育。IFN-γ在諸如自身免疫和動脈粥樣硬化這樣的炎性疾病進程中發(fā)揮重要作用。
??????具有生物活性的IFN-γ是由2個20-25kDa糖基化亞基以非共價鍵連接構(gòu)成的同源二聚體。成熟大鼠的IFN-γ與小鼠的IFN-γ氨基酸同源性為86%，與牛、犬、棉鼠、馬、貓科動物、豬、人和獼猴的氨基酸同源性為37-45%。IFN-γ首先與跨膜IFN-γ RI (α亞基)結(jié)合，然后與跨膜IFN-γ RII (β亞基)作用形成由2個α亞基和2個β亞基構(gòu)成的功能性受體復(fù)合物。受體復(fù)合物中的IFN-γ RII能夠增強配體結(jié)合親和力及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
??????在炎癥狀態(tài)下很多細胞都能產(chǎn)生IFN-γ，包括樹突狀表皮細胞/γδ T細胞、角化細胞、外周血γδ T細胞、肥大細胞、神經(jīng)細胞、CD8⁺ T細胞、巨噬細胞、B細胞、中性粒細胞、NK細胞、CD4⁺ T細胞和睪丸精子。
??????IFN-γ與受體結(jié)合后激活JAK1和JAK2，活化后的JAKs協(xié)助IFN-γ R與STAT1結(jié)合，在JAKs的作用下STAT1發(fā)生磷酸化并形成同源二聚體，隨后該聚合物進入細胞核調(diào)控相關(guān)基因的表達。SOCS能夠通過抑制JAK和STAT的磷酸化從而抑制IFN-γ的信號傳遞，影響其功能。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中大鼠IFN-γ的濃度，其原理見圖1。大鼠IFN-γ特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的大鼠IFN-γ會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗大鼠IFN-γ抗體后，生物素化抗大鼠IFN-γ抗體與大鼠IFN-γ結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。大鼠IFN-γ濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中IFN-γ濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。
注意事項：
??????由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。