"KARPAS 299|人淋巴瘤細胞

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不好、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不好》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；2)避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，經(jīng)過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；2)培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。

KARPAS 299 Cell

100-81-2

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良好，當補液時，需避免反復吹打。

KARPAS 299|人淋巴瘤細胞

細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分

細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

HL60細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

CEMO-1細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：急性B淋巴細胞白血??；男性

MLE 12細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

RBMEC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腦微血管；內(nèi)皮細胞

MHCC97-H(MHCC97H)細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

KYSE450細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：食管鱗癌；男性

NCI-H2106[H2106]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系

KARPAS 299|人淋巴瘤細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

NCI-H1944[H1944]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

Y79細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：圓形，成簇生長；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：1971年1月，該細胞由ReidTW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進行原代培養(yǎng)建立而成，此病人有很強的視網(wǎng)膜母細胞瘤的母系家族遺傳性。該細胞的超微結(jié)構(gòu)，如核膜內(nèi)折、三層膜結(jié)構(gòu)、大的被膜小泡、環(huán)孔板、微管、中心粒、基粒等都與原始腫瘤相似。

Pt-K2(PtK2)細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

MMVECs細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：心肌微血管；內(nèi)皮細胞

HepaRG細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：肝癌；女性

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：１)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細胞懸液接種１)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；２)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)８０～１００目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液；３)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；４)計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至１０(７)～１０(８)/ml；５)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(０.１ml/部位，＞１０(６)細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；６)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：１)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；２)消毒動物，左下腹穿刺接種１×１０(６)腹水瘤細胞；３)接種腹水瘤細胞后約７-１２d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３-５ml；４)抽取的腹水經(jīng)３０００rpm離心１５min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>