"TE12|人食道癌腫瘤細(xì)胞

細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)分布不均勻，通常操作步驟：做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪板大概是我們最常見(jiàn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。但有時(shí)候鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。下面為大家分享幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對(duì)于易于消化的細(xì)胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤(rùn)洗一遍（25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠，延長(zhǎng)消化時(shí)間。96孔板一般以100微升每孔接種，直接用100微升移液器吸取細(xì)胞懸液，沿孔壁（稍離開(kāi)一點(diǎn)孔底即可，不要離底太高）直接接入，移液器不需完全打到，輕輕按下即可，每鋪完一行換一次槍頭同時(shí)輕輕混勻細(xì)胞懸液。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好），依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。6孔板、12孔板或24孔板，可采用將每個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基，晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤(rùn)孔底，其它孔依此類推，這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的，細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒(méi)有96孔板好掌握，效果沒(méi)有96孔板好。培養(yǎng)瓶里面加好細(xì)胞以后(比如傳代好/分好細(xì)胞以后)，先順時(shí)針搖晃3次，馬上逆時(shí)針搖晃3次。然后延X(jué)軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復(fù)延X(jué)軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。

TE12 Cell

1074-40-4

細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒(méi)有搖勻，或者放入時(shí)搖勻，但在細(xì)胞貼壁前，又移動(dòng)了培養(yǎng)瓶，頻繁開(kāi)關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動(dòng)或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過(guò)少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻。研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。運(yùn)輸過(guò)程對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響。解凍過(guò)程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C 太久。一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)（該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán)）。部分細(xì)胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等），這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過(guò)調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來(lái)調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)；如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

TE12|人食道癌腫瘤細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

HASMC細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

C4-2B細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：前列腺癌；左鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；男性

HFT-8810細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

TEV-1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：滋養(yǎng)層

L-540細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸?。患?xì)胞背景資料：霍奇金淋巴瘤；女性

Y3-Ag 1.2.3細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

DRG細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：背根神經(jīng)細(xì)胞

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

TE12|人食道癌腫瘤細(xì)胞

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

NCI-H441細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：3傳代,2-3天傳一代；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：NCI-H441建系于1982年（A.F.Gazdar，etal.)。該細(xì)胞分離自一名肺腺癌患者的心包液。該細(xì)胞能在半固體瓊脂糖中形成克隆，并能表達(dá)肺泡表面活性蛋白A。該細(xì)胞在有血清培養(yǎng)基中倍增時(shí)間為58小時(shí)，在無(wú)血清培養(yǎng)基中倍增時(shí)間為99-138小時(shí)。

NCI-H1648[H1648]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

HNE-2細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：鼻咽癌

NCI-H2291[H2291]細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

HFB細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：皮膚成纖維細(xì)胞

傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：１)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細(xì)胞懸液接種１)無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞；２)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)８０～１００目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液；３)培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍；４)計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至１０(７)～１０(８)/ml；５)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(０.１ml/部位，＞１０(６)細(xì)胞)。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些；６)次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下：１)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；２)消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種１×１０(６)腹水瘤細(xì)胞；３)接種腹水瘤細(xì)胞后約７-１２d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３-５ml；４)抽取的腹水經(jīng)３０００rpm離心１５min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>