"NMC-G1細胞：人腦膠質(zhì)細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

NMC-G1 Cell

細胞形態(tài)特性：上皮細胞

271-29-4

很多朋友討論細胞培養(yǎng)問題，見到很多很好的經(jīng)驗總結(jié)，這里說一些我個人的經(jīng)驗，因為一些比較特殊的原因，我自己培養(yǎng)接觸過近300種細胞，常用于做實驗的，累積有百余種，可以說遇到過許多各式各樣古怪的細胞。這里挑細胞消化開始做我的篇專題，并不是因為細胞消化最重要，而是近期看到大家頻繁討論這個話題，我就拋磚引玉，下面幾點拙見，可能與其它朋友總結(jié)的一些經(jīng)驗有點出入，僅供大家參考。許多同學(xué)對細胞消化做了許多研究，得出了很多有價值的經(jīng)驗，也見到很多人的困惑。其實細胞培養(yǎng)，尤其是細胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結(jié)經(jīng)驗，就能把細胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識，如果不對之處，歡迎指正，總結(jié)下來，細胞培養(yǎng)中消化很重要，但其實消化并不是細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵所在(雖然很重要)，關(guān)鍵所在是細胞來源，血清質(zhì)量和水源(自己配制溶液的話)。我看到版上許多人養(yǎng)細胞遇到各種各樣的問題，很多時候bottleneck沒有找到，雖然通過其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因為人們往往注意自己的操作，總覺得自己沒有經(jīng)驗，而忽視試劑，溶液尤其是細胞的質(zhì)量，后者其實才是許多細胞培養(yǎng)實驗室常見的問題。

NMC-G1細胞：人腦膠質(zhì)細胞

細胞生長特性：貼壁生長

C13K細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

TT細胞系；細胞傳代方法：1：3-1：4傳代，每周換液2次；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：TT細胞由LeongSS等，自一位77歲白人女性甲狀腺髓樣癌患者的穿刺活檢樣本中建立。TT細胞持續(xù)產(chǎn)生高水平的降血素和CEA。更換培養(yǎng)基后24h和72h，在培養(yǎng)基中檢測到的免疫活性的降血素濃度分別為3900pg/106個細胞和7700pg/106個細胞。72小時后CEA積累濃度超過27ng/106個細胞；該細胞最初是在RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，可產(chǎn)生神經(jīng)肽，但還不知道在F12培養(yǎng)液中培養(yǎng)是否會產(chǎn)生。

D283med細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

NIH3T3細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

HFL1細胞系；細胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內(nèi)可長滿；細胞形態(tài)特性：成纖維細胞樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

【細胞培養(yǎng)中支原體、黑蛟蟲、真菌的污染情況總結(jié)】支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度；黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率；真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。

MX-1細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

TH1細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：懸??；細胞背景資料：調(diào)節(jié)T細胞

SU-DHL-16細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

NCI-H292細胞系；細胞傳代方法：1：3-1：8傳代；2-3天換液1次；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

HT29細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

Jiyoye細胞系；細胞傳代方法：每周2-3次；細胞形態(tài)特性：淋巴母細胞；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

NMC-G1細胞：人腦膠質(zhì)細胞

細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系

細胞傳代注意事項：①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材；②每天觀察細胞形態(tài)，掌握好細胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn)：健康細胞的形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代；③如發(fā)現(xiàn)細胞有污染跡象，應(yīng)立即采取措施，一般應(yīng)棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗，隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。傳代細胞的建系和維持：細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現(xiàn)。對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。

細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

NMC-G1細胞：人腦膠質(zhì)細胞

細胞傳代方法：1：2傳代

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：1)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導(dǎo)致細胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過高時，消化時間應(yīng)縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細胞懸液接種1)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液；3)培養(yǎng)細胞應(yīng)用PBS洗兩遍；4)計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；2)消毒動物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細胞；3)接種腹水瘤細胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>