"U251 MG細胞：人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

U251 MG Cell

細胞形態(tài)特性：成纖維細胞樣

16386-93-9

細胞傳代培養(yǎng)(消化法)標準操作規(guī)程【原理】細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶?！静牧虾驮噭?)無菌生理緩沖液(PBS)；2)胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分裝于15 ml無菌離心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回溫；3)新鮮培養(yǎng)基；4)無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶【傳代前準備操作】1)預熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱；2)用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手；3)正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染；4)點燃酒精燈：注意火焰不能太??；5)準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶；6)取出預熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)；7)從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞：注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞；8)打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

U251 MG細胞：人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

細胞生長特性：貼壁

Rat podocyte細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腎；足細胞

HTEpiC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

HCC2157細胞系；細胞傳代方法：每周換液2—3次；細胞形態(tài)特性：上皮樣；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

SNB19細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：星形膠質(zhì)瘤；男性

BT474細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；2-3天換液1次；細胞形態(tài)特性：上皮樣；圓形、成團；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：該細胞系由LasfarguesE和CoutinhoWG建立，源于一名60歲患有浸潤性乳腺導管癌的白人女性的實體瘤。

【細胞培養(yǎng)中細菌、霉菌的污染情況總結(jié)】細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理；霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉(zhuǎn)移，采用擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把放置在孵箱內(nèi)一個小時，使其蒸汽彌漫。待的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右)，尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或D或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。

ACC-2細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：涎腺腺樣囊性癌；男性

HUT102細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

HIEC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腸；上皮細胞

HMVEC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：微血管；內(nèi)皮細胞

Hela229[HeLa229]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

293F細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：上皮細胞樣；細胞生長特性：貼壁生長；懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

U251 MG細胞：人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系

細胞培養(yǎng)實驗基本操作：①進無菌室前要徹底洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系的傳代工作應由兩人獨立進行；無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比，的優(yōu)點是便宜，而且可以稀釋50倍用，而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉，熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。

細胞背景資料：U-251 MG分離至一位患者的膠質(zhì)母細胞瘤組織。

U251 MG細胞：人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞

細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：1)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細胞懸液接種1)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液；3)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；4)計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；2)消毒動物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細胞；3)接種腹水瘤細胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>