"SNU-1細胞：人胃癌細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

SNU-1 Cell

細胞形態(tài)特性：上皮細胞

262-20-4

我常看到一個比較復(fù)雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是次聽說，應(yīng)該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數(shù)非常怪異的細胞才需要這么復(fù)雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個視細胞而定。如果和標準形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導(dǎo)致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會對你越來越不好；比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化)，就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次最多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應(yīng)該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

SNU-1細胞：人胃癌細胞

細胞生長特性：懸浮聚集

RMC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁；細胞背景資料：腎系膜

NCI-H295R[H295R]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

HME2細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

HBSMC細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

C8-D1A [Astrocyte type I clone]細胞系；細胞傳代方法：1：4-1：6傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：神經(jīng)元細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

養(yǎng)了幾年細胞，說一點自己培養(yǎng)細胞方面的看法：1)培養(yǎng)細胞前，可以看看細胞特點說明書，包括細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等；2)不同細胞生長周期不同，有的生長很快，比如說MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了，有的又是特別慢，等的人心焦，BT474就是，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時候兩周多才能長滿，所以就要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索了；3)對于嬌弱的細胞，就得細心呵護了，胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉(zhuǎn)速和時間，每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況；4)凍存細胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基；5)培養(yǎng)箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次；6)養(yǎng)細胞的教訓(xùn)：不能偷懶!細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。1)不管買的細胞、惠贈的細胞，剛拿到手趕緊做兩件事：檢測是否有支原體污染; 迅速擴增凍存；2)發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細胞時; 細菌污染，真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細胞會長的慢，買個支原體檢測的kit定期檢測一下；3)傳代細胞日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸；4)細胞的傳代一定要規(guī)律，保持相同的confluency和傳代時間間隔，不要隨心所欲或者拖延；5)注意個人衛(wèi)生。

KYSE-450細胞系；細胞傳代方法：1：2傳代；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

LNCaP clone FGC細胞系；細胞傳代方法：消化3-5分鐘。1：2。3天內(nèi)可長滿；細胞形態(tài)特性：上皮細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：人前列腺癌細胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。 這株細胞對5-α-二睪酮(生長調(diào)節(jié)子和酸性脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。這株細胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。它們僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。生長很慢。傳代后48小時內(nèi)不應(yīng)擾動。當(dāng)培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)細胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細胞的條件下培養(yǎng)24到48小時，以合細胞再貼壁。

NCI-H2122細胞系；細胞傳代方法：1：3-1：4傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：淋巴母細胞；細胞生長特性：貼壁生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

FC33細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

D341 Med細胞系；細胞傳代方法：每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：髓母細胞樣；細胞生長特性：懸浮生長；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

SW480[SW-480]細胞系；細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書；細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分；細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

SNU-1細胞：人胃癌細胞

細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系

培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融?！緝龃婕毎?)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液；2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達5×10／ml左右密度，離心，去上清；3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外；4)分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液；5)旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記；6)凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩?fù)蘇細胞】1)從罐中取出凍存管；2)迅速放入36℃～37℃水浴，不時搖動，使其急速融化，30～60s內(nèi)完成；3)凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養(yǎng)液；4)低速離心(500～1000r／min) 5min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；5)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達到10／ml，在融后稀釋20倍時，仍能保持5×10／ml數(shù)量。

細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹

SNU-1細胞：人胃癌細胞

細胞傳代方法：2-3天換液1次。

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：1)掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導(dǎo)致細胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過高時，消化時間應(yīng)縮短，過低時細胞消化時間相對延長。體內(nèi)細胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細胞懸液接種1)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過濾成細胞懸液；3)培養(yǎng)細胞應(yīng)用PBS洗兩遍；4)計數(shù)并調(diào)整細胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細胞)。初次接種成功率低，細胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數(shù)；2)消毒動物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細胞；3)接種腹水瘤細胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>