產(chǎn)品描述
2×Hieff® PCR Master Mix是即用型的常規(guī)PCR預(yù)混合溶液,含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及優(yōu)化的緩沖體系。反應(yīng)時(shí)只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增,大大簡化實(shí)驗(yàn)的操作步驟。本產(chǎn)品中含有優(yōu)良的穩(wěn)定劑,在4℃條件下以放置3個(gè)月。PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端,可輕松克隆至T載體。
反應(yīng)體系(50 μL)
反應(yīng)體系(50 μL) 擴(kuò)增程序
組分
體積(μL)
循環(huán)步驟
溫度(℃)
時(shí)間
循環(huán)數(shù)
模板DNA
適量
預(yù)變性
94
5 min
1
引物1(10 μM)
2
變性
30 sec
35
引物2(10 μM)
退火
50-60
2×Hieff® PCR Master Mix
25
延伸
72
30 sec/kb
ddH2O
to 50
終延伸
10 min
注:使用前請(qǐng)務(wù)必將其徹底混勻。
a)模板使用量:基因組DNA:50~200 ng;質(zhì)粒DNA:0.1~10 ng。 b)Mg2+濃度:本產(chǎn)品中含有3 mM的MgCl2,適合大部分PCR反應(yīng)。 c)退火溫度:請(qǐng)參考引物的理論Tm值,退火溫度可設(shè)置低于引物理論值2-5℃。 d)延伸時(shí)間:分子鑒定建議30 sec/kb?;蚩寺〗ㄗh60 sec/kb,以保證產(chǎn)物量達(dá)到最高。
注意事項(xiàng)
本產(chǎn)品PCR產(chǎn)物不適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。如有需要,請(qǐng)選擇本公司產(chǎn)品(貨號(hào):10101ES)。 應(yīng)用實(shí)例
圖1: 2×Hieff® PCR Master Mix擴(kuò)增1.2 kb片段。產(chǎn)品分別在-20℃放置1年,4℃放置3個(gè)月,25℃放置1個(gè)月后均可有效擴(kuò)增目的片段。模板:擬南芥基因組;退火溫度:60℃;延伸時(shí)間:40 sec。
上海翊圣生物科技有限公司
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