產(chǎn)品描述

Hieff NGS^® MaxUp Dual-model mRNA Library Prep Kit for Illumina^®是針對Illumina^®高通量測序平臺專門研發(fā)的用于mRNA轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建試劑盒，本試劑盒cDNA二鏈合成模塊配有兩種buffer，客戶可根據(jù)需要進(jìn)行常規(guī)建庫或鏈特異性建庫。本產(chǎn)品適用于起始模板為10 ng-1μg不同來源真核生物總RNA樣本。經(jīng)過mRNA分離、片段化、鏈雙鏈cDNA合成、末端修復(fù)、加A尾、接頭連接和文庫擴增，總RNA樣品最終轉(zhuǎn)化為適用于Illumina^®平臺測序的文庫。

試劑盒包含三個獨立模塊，BOX-I的核心為純化mRNA所需的poly（A）磁珠。BOX-II包含mRNA片段化試劑，反轉(zhuǎn)錄試劑，常規(guī)和鏈特異性dscDNA合成所需的所有試劑。其中鏈特異性二鏈合成buffer中將dTTP替換為dUTP，使cDNA第二鏈中摻入dUTP，而本試劑盒使用的高保真DNA聚合酶無法擴增含尿嘧啶的DNA模板，實現(xiàn)鏈特異性。BOX-III實際上是一個高效的微量DNA文庫構(gòu)建試劑盒，來自我公司的Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®。提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗證，程度上保證了文庫構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

保存方法

       冰袋運輸。效期一年。存儲溫度如下，切不可搞錯！

       Box I：2-8℃保存；Box II：-20℃保存；Box III：-20℃保存。
 

注意事項

一、 關(guān)于操作

1.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2.請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。

3.推薦在帶熱蓋的PCR儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近。
4.請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用ThermoFisher公司的RNAZap^TM高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
5.PCR產(chǎn)物因操作不當(dāng)極容易產(chǎn)生氣溶膠污染，進(jìn)而影響實驗結(jié)果準(zhǔn)確性。推薦將PCR反應(yīng)體系配制區(qū)和PCR產(chǎn)物純化檢測區(qū)進(jìn)行強制性的物理隔離；配備文庫構(gòu)建專用移液器等設(shè)備；定時對各實驗區(qū)域進(jìn)行清潔（推薦使用ThermoFisher公司的DNAZap^TM高效核酸去除噴霧），以保證實驗環(huán)境的潔凈度。

二、應(yīng)用范圍

      本試劑盒適用于起始模板量為10-1000 ng（體積≤50 μL）的高質(zhì)量動物、植物和真菌等真核生物的總RNA。如初始RNA濃度偏低，體積超過50 μL，可使用Hieff NGS^® RNA Cleaner磁珠進(jìn)行濃縮。RNA需通過Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片檢測，RIN值要求＞7，以保證mRNA有完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu)。

      本試劑盒的mRNA分離模塊使用的是oligo d(T)磁珠，只有帶poly(A)尾的mRNA才能被提?。黄渌痪遬oly(A)尾的mRNA，如非編碼RNA、無poly(A)尾的mRNA等不能適用本試劑盒。此外，F(xiàn)FPE樣本中的mRNA降解嚴(yán)重，通常無完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu)，故亦無法使用本試劑盒進(jìn)行建庫。

      本試劑盒所制備文庫可進(jìn)行多種RNA-Seq應(yīng)用，包括：

基因表達(dá)（gene expression）

單核苷酸變異檢測（single nucleotide variation discovery）

基因融合鑒定（gene fusion identification）

剪切變異體分析（splice variant analysis）