產(chǎn)品描述
Hieff NGS® MaxUp Dual-model mRNA Library Prep Kit for Illumina®是針對(duì)Illumina®高通量測(cè)序平臺(tái)專門(mén)研發(fā)的用于mRNA轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)構(gòu)建試劑盒，本試劑盒cDNA二鏈合成模塊配有兩種buffer，客戶可根據(jù)需要進(jìn)行常規(guī)建庫(kù)或鏈特異性建庫(kù)。本產(chǎn)品適用于起始模板為10 ng-1μg不同來(lái)源真核生物總RNA樣本。經(jīng)過(guò)mRNA分離、片段化、鏈雙鏈cDNA合成、末端修復(fù)、加A尾、接頭連接和文庫(kù)擴(kuò)增，總RNA樣品最終轉(zhuǎn)化為適用于Illumina®平臺(tái)測(cè)序的文庫(kù)。
試劑盒包含三個(gè)獨(dú)立模塊，BOX-I的核心為純化mRNA所需的poly（A）磁珠。BOX-II包含mRNA片段化試劑，反轉(zhuǎn)錄試劑，常規(guī)和鏈特異性dscDNA合成所需的所有試劑。其中鏈特異性二鏈合成buffer中將dTTP替換為dUTP，使cDNA第二鏈中摻入dUTP，而本試劑盒使用的高保真DNA聚合酶無(wú)法擴(kuò)增含尿嘧啶的DNA模板，實(shí)現(xiàn)鏈特異性。BOX-III實(shí)際上是一個(gè)高效的微量DNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒，來(lái)自我公司的Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®。提供的所有試劑都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，程度上保證了文庫(kù)構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
保存方法
冰袋運(yùn)輸。效期一年。存儲(chǔ)溫度如下，切不可搞錯(cuò)！
Box I：2-8℃保存；Box II：-20℃保存；Box III：-20℃保存。
注意事項(xiàng)
一、 關(guān)于操作
1.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2.請(qǐng)于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
3.推薦在帶熱蓋的PCR儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近。
4.請(qǐng)使用無(wú)RNase污染的耗材，并對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用ThermoFisher公司的RNAZapTM高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
5.PCR產(chǎn)物因操作不當(dāng)極容易產(chǎn)生氣溶膠污染，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。推薦將PCR反應(yīng)體系配制區(qū)和PCR產(chǎn)物純化檢測(cè)區(qū)進(jìn)行強(qiáng)制性的物理隔離；配備文庫(kù)構(gòu)建專用移液器等設(shè)備；定時(shí)對(duì)各實(shí)驗(yàn)區(qū)域進(jìn)行清潔（推薦使用ThermoFisher公司的DNAZapTM高效核酸去除噴霧），以保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境的潔凈度。
二、應(yīng)用范圍
本試劑盒適用于起始模板量為10-1000 ng（體積≤50 μL）的高質(zhì)量動(dòng)物、植物和真菌等真核生物的總RNA。如初始RNA濃度偏低，體積超過(guò)50 μL，可使用Hieff NGS® RNA Cleaner磁珠進(jìn)行濃縮。RNA需通過(guò)Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片檢測(cè)，RIN值要求＞7，以保證mRNA有完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu)。
本試劑盒的mRNA分離模塊使用的是oligo d(T)磁珠，只有帶poly(A)尾的mRNA才能被提??；其他不具poly(A)尾的mRNA，如非編碼RNA、無(wú)poly(A)尾的mRNA等不能適用本試劑盒。此外，F(xiàn)FPE樣本中的mRNA降解嚴(yán)重，通常無(wú)完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu)，故亦無(wú)法使用本試劑盒進(jìn)行建庫(kù)。
本試劑盒所制備文庫(kù)可進(jìn)行多種RNA-Seq應(yīng)用，包括：
基因表達(dá)（gene expression）
單核苷酸變異檢測(cè)（single nucleotide variation discovery）
基因融合鑒定（gene fusion identification）
剪切變異體分析（splice variant analysis）
關(guān)鍵字： MAXUPMRNA 建庫(kù)試劑盒_基因_
上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是專注于酶制劑和抗原抗體開(kāi)發(fā)的高新技術(shù)型企業(yè)，致力于為生命科學(xué)研究領(lǐng)域內(nèi)的科研客戶及精準(zhǔn)醫(yī)療相關(guān)行業(yè)的工業(yè)客戶提供高質(zhì)量的產(chǎn)品和優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。
公司現(xiàn)階段建設(shè)有分子、蛋白、細(xì)胞和免疫四大技術(shù)平臺(tái)，涵蓋全面豐富的產(chǎn)品線，包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)制劑、克隆試劑盒、高通量測(cè)序MaxUP系列DNA和RNA建庫(kù)試劑盒、細(xì)胞培養(yǎng)、支原體檢測(cè)/預(yù)防/去除試劑，以及體外診斷相關(guān)的酶原料、試劑和磁珠等3000多種試劑和試劑盒，服務(wù)于全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等2.5萬(wàn)家客戶，助力發(fā)表高質(zhì)量SCI論文1000余篇。
未來(lái)，我們?nèi)?