土壤基因組DNA提取試劑盒(目錄號:RTG2403)
● 試劑盒內(nèi)容及保存:
● 儲存條件和效期:
本試劑盒在室溫(25℃左右)干燥條件下,可保存1年。緩沖液R2和R3可能有沉淀產(chǎn)生,若溶液產(chǎn)生沉淀,應(yīng)在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。
● 產(chǎn)品簡介:
土壤樣品存在大量的抑制因子如腐殖酸、金屬離子等,而純化的DNA 中只要有這些微量物質(zhì)的存在,都會影響到PCR等酶促反應(yīng)。本公司的土壤試劑盒采用獨特的腐殖酸去除液(緩沖液R2)能夠有效去除腐殖酸;吸附柱CG能能有效去除金屬等抑制因子,提純得到的基因組DNA可直接用于PCR 反應(yīng),酶切或定量實驗。
● 準備工作:
1. 準備55℃,70℃水浴;無水乙醇;異丙醇;制冰機;1.5ml離心管;2ml離心管
2. 按照標簽所示在漂洗緩沖液PW中加入無水乙醇;緩沖液R5中加入異丙醇,混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存?zhèn)溆谩?/p>
3. 每次使用前請檢查緩沖液R2,緩沖液R3是否有沉淀生成,如果出現(xiàn)沉淀,37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。
● 標準操作步驟:
如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1. 稱0.3-0.5 g土壤置于2ml離心管中,加入0.4 g Glass Beads,再加入700 μl 緩沖液R1與100 μl 緩沖液R2。渦旋器高速震蕩3-5min。
注意:對含水量豐富的樣品,可以預(yù)先離心除去部分水分后再稱取樣品。緩沖液R2是腐殖酸去除劑,100μl對大部分樣品來說足以有效除去腐殖酸等抑制因子。對一些腐殖酸含量特別豐富的土壤, 緩沖液R2的量可以適當增加,但不能超過250μl,否則會嚴重影響DNA的得率。
2. 加入100 μl 緩沖液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用),渦旋混勻。 70℃水浴處理10min。期間振蕩幾次。
注意:如果要純化革蘭氏陽性菌的DNA,請在70℃處理完后,再90℃水浴處理2min。
3. 12000 rpm(~13,000g)離心1分鐘,取600μl上清到1.5ml離心管中,加入180 μl 緩沖液R4混勻。
注:轉(zhuǎn)移上清時確保不要吸取到沉淀,轉(zhuǎn)移的上清量不超過80%。
4. 冰上放置5分鐘。12000 rpm(~13,000g)離心1分鐘。 轉(zhuǎn)移上清到新的1.5ml離心管中。
注:轉(zhuǎn)移上清時確保不要吸取到沉淀,轉(zhuǎn)移的上清量不超過80%。
5. 加入與上清等體積的緩沖液R5(使用前請檢查是否已加入異丙醇),顛倒混勻。
6. 取750 μl混合液加到吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12000 rpm(~13,000g)離心30秒,倒掉濾出液。
7. 將剩余的混合液加到吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13,000g)離心30秒,倒掉濾過液。
8. 向吸附柱CG中加入500μl 漂洗緩沖液WB1,12,000 rpm (~13,000×g ) 離心30 秒,倒掉廢液。
9. 向吸附柱CG中加入600μl 漂洗緩沖液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm (~13,000g) 離心30 秒,倒掉廢液,吸附柱CG放入收集管中。
10. 向吸附柱CG中加入600μl漂洗緩沖液PW,12,000 rpm (~13,000g) 離心30秒,倒掉廢液,將吸附柱CG放入收集管中。
11. 12,000 rpm(~13,000g)離心2分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注:此步驟非常重要,其目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實驗。
12. 將吸附柱CG轉(zhuǎn)入一個干凈的1.5ml離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50–100 μl經(jīng)70℃水浴預(yù)熱的洗脫緩沖液EB,室溫放置2分鐘,12,000 rpm(~13,000g)離心2分鐘。
注; = 1 \* GB3 ① 洗脫緩沖液體積不少于50 μl,體積過小影響回收效率。
= 2 \* GB3 ② 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi),pH值低于7.0會降低洗脫效率。
13. DNA產(chǎn)物-20℃保存。
大量操作步驟(針對含微量核酸的樣品)
1. 稱1-5g土壤置于10ml離心管中,加入1g Glass Beads,再加入3ml 緩沖液R1與200μl 緩沖液R2。渦旋器高速震蕩3-5分鐘。
2. 加入600μl 緩沖液R3,渦旋混勻。70℃水浴處理10分鐘。期間振蕩幾次。
3.3000g離心3分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,加入550μl 緩沖液R4混勻。
4. 冰上放置5分鐘。8000g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中。
5. 以下按標準操作步驟的第五步繼續(xù)操作。
● DNA濃度及純度檢測:
基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。可配制0.8-1.0%瓊脂糖凝膠,使用λ/HindIII判斷基因組的大小,完整的基因組大小應(yīng)在23kb以上。使用分光光度計檢測時, OD260/OD280比值應(yīng)為1.7–1.9之間,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水洗脫,比值可能偏低,但并不表明DNA純度不高。
關(guān)鍵字: 土壤基因組DNA提取試劑盒_DNA提取_DNA純化_
中科瑞泰(北京)生物科技有限公司成立于2006年,是一家致力于產(chǎn)品研發(fā)、試劑銷售、技術(shù)服務(wù)為一體的生物技術(shù)企業(yè)。公司秉承“以人為本,誠信至上”的服務(wù)理念,依靠客戶的大力支持和我們的不懈努力獲得了快速的發(fā)展。
公司組織結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)部管理科學(xué),擁有一支配備合理的年輕化隊伍,充分保障了公司的研發(fā)能力和在競爭日益激烈的市場中占據(jù)一席之地。
我們深知一顆幼苗的萌發(fā)和成長不僅需要我們堅強的信念和持久的毅力,更離不開廣大用戶的呵護和培養(yǎng),是廣大客戶給了我們廣闊的成長和發(fā)展空間,使這顆幼苗得以抽枝展葉,繼而繁茂生長。在這里,請廣大客戶接受我們最為誠摯的謝意!我們也承諾將為你們提供最為優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和最為優(yōu)良的