一、CBA流式多因子檢測(cè)原理介紹
CBA(Cytometric Bead Array)技術(shù)是基于包被抗體的微球并利用流式細(xì)胞儀同時(shí)對(duì)多種蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析的創(chuàng)新性技術(shù)。它是一系列不同熒光強(qiáng)度、各自包被不同捕獲抗體的微球，在同一反應(yīng)中與少量樣本混合孵育來(lái)捕獲相應(yīng)抗原，再與帶熒光標(biāo)記的第二種抗體以雙抗夾心的結(jié)合方式，用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)區(qū)別不同微球，再分析每個(gè)微球上的定量抗原的熒光素強(qiáng)度，根據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白和對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，來(lái)擬合計(jì)算未知樣本中的相應(yīng)抗原濃度。

Cytometric Bead Array（CBA），即細(xì)胞因子微球檢測(cè)技術(shù)。是一種基于流式細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測(cè)方法，它能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。BD公司利用流式細(xì)胞儀可對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行級(jí)數(shù)放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細(xì)胞直徑的微粒上，即可對(duì)受檢樣品中的各種可溶性因子進(jìn)行檢測(cè)。 CBA的基本原理近似于ELISA的檢測(cè)，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測(cè)物，并利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)類似“三明治”的顆粒——待測(cè)物復(fù)合體所散發(fā)的熒光，從而測(cè)定待測(cè)物的數(shù)量。

每個(gè)CBA微球大小一致，具有特定的熒光強(qiáng)度，包被有適用于特定分析（如其它抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體（Capture Antibody），提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當(dāng)微球和待測(cè)樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品（血清、血漿或者細(xì)胞培養(yǎng)液）中相應(yīng)的抗原或蛋白結(jié)合，然后加入熒光標(biāo)記的檢測(cè)抗體，就會(huì)形成“三明治”夾心復(fù)合物。最后通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)特異性目的蛋白進(jìn)行檢測(cè)。CBA的每種微球攜帶有不同強(qiáng)度的紅色熒光，在流式細(xì)胞儀的FL3通道通過(guò)檢測(cè)微球熒光強(qiáng)度的差異對(duì)目的蛋白定性；檢測(cè)抗體帶有PE熒光素標(biāo)記，在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè)，通過(guò)檢測(cè)抗體的PE熒光強(qiáng)度定量目的蛋白。
 

二、CBA技術(shù)特點(diǎn)

CBA是集ELISA和細(xì)胞流式技術(shù)優(yōu)點(diǎn)為一身的液相蛋白檢測(cè)技術(shù)。CBA的每一種微球提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測(cè)樣品后，呈懸浮態(tài)，與ELISA相比，能更有效地捕獲被分析物；CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測(cè)特點(diǎn)，對(duì)樣本需求量更少，檢測(cè)更快速、更準(zhǔn)確。CBA主要的技術(shù)特點(diǎn):

1、輕松實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)。最多可同時(shí)對(duì)一個(gè)樣本中的75個(gè)目的蛋白進(jìn)行精確定量。

2、樣本需要量小。僅需要50μL溶液就可進(jìn)行一次檢測(cè)。

3、更高的靈敏度。分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL。

4、更高的靈敏度、更寬的檢測(cè)范圍和更好的重復(fù)性。CBA技術(shù)使蛋白定量的分析靈敏度高達(dá)pg/ml級(jí)別,檢測(cè)范圍達(dá)0-5000pg/ml，所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)抗體的熒光強(qiáng)度對(duì)目的蛋白定量，排除了ELISA反應(yīng)中酶聯(lián)放大產(chǎn)生的假陽(yáng)性。

5、檢測(cè)對(duì)象的靈活組合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同時(shí)檢測(cè)試劑盒配好的6個(gè)指標(biāo)，形式比較固定。為滿足不同客戶的實(shí)際需要和研究興趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式，成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來(lái)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，最多能同時(shí)檢測(cè)75個(gè)指標(biāo)。除了擁有CBA kit的優(yōu)勢(shì)外，F(xiàn)lex Set還配有獨(dú)立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上，直接用96孔和384孔板進(jìn)行操作。CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由，更大的選擇空間，而且進(jìn)一步豐富了CBA產(chǎn)品線。種類涉及免疫、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等許多領(lǐng)域的蛋白定量分析。

6、操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力。CBA技術(shù)采用芯片式集成測(cè)定，所有檢測(cè)只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可計(jì)算出每種待測(cè)蛋白濃度；操作簡(jiǎn)單，整個(gè)流程只需要3.5小時(shí)，對(duì)待測(cè)樣本可做實(shí)時(shí)分析，縮短檢測(cè)了時(shí)間，提高了檢測(cè)效率。

7、強(qiáng)大的軟件分析系統(tǒng)。BD CBA軟件具有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理能力，直接將目標(biāo)蛋白的檢測(cè)結(jié)果換算成標(biāo)準(zhǔn)濃度；除了為用戶提供待測(cè)物的計(jì)數(shù)結(jié)果外，還能提供可視輪廓或信號(hào)圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統(tǒng)兩種版本供您選擇。和傳統(tǒng)的液相蛋白定量技術(shù)相比，CBA技術(shù)是一種“多元”和“同步”的檢測(cè)技術(shù)。CBA應(yīng)用：自CBA上市以來(lái)，越來(lái)越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清、唾液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中細(xì)胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白分析，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究，藥物對(duì)病人的治療效果評(píng)估，藥物研發(fā)，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域。革新的CBA技術(shù)與傳統(tǒng)的蛋白定量相比有下列優(yōu)點(diǎn)：