細胞名稱：OKT 11    小鼠雜交瘤細胞(抗CD2)

組織來源：小鼠B淋巴細胞，小鼠淋巴瘤細胞

培養(yǎng)條件：IMDM+20% FBS

形       態(tài)：懸??；淋巴母細胞

背       景：小鼠用人的T細胞白血病細胞(急性淋巴細胞白血病)進行免疫。 脾細胞與P3X63Ag8.U1骨髓瘤細胞融合。免疫球蛋白；單克隆抗體；抗人T細胞(人T淋巴細胞)和人E玫瑰花環(huán)反應陽性胸腺細胞(人胸腺淋巴細胞)；抗CD2。

OKT 11(小鼠雜交瘤細胞(抗CD2))“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數(shù)／100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進行各種試驗。

formazan結晶的生成量僅與活OKT 11(小鼠雜交瘤細胞(抗CD2))數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.OKT 11(小鼠雜交瘤細胞(抗CD2))培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制OKT 11(小鼠雜交瘤細胞(抗CD2))生長曲線。