細(xì)胞名稱(chēng)：NR8383    大鼠肺泡巨噬細(xì)胞

組織來(lái)源：肺；巨噬細(xì)胞；肺泡

培養(yǎng)條件：F-12K +20% FBS

形       態(tài)：貼壁和懸浮混合；巨噬細(xì)胞

背       景：NR8383來(lái)源于肺灌洗時(shí)的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個(gè)月。隨后，不再需要外源生長(zhǎng)因子。通過(guò)有限稀釋法從單個(gè)細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長(zhǎng)因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF beta前體。在博萊霉素刺激下，TGF beta mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生達(dá)50%。 即使達(dá)到0.001mg/mL的水平，LPS抑制還是無(wú)毒且在后續(xù)過(guò)程中可逆的。 NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來(lái)源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。

NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時(shí)期，稱(chēng)指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期)，適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。

formazan結(jié)晶的生成量?jī)H與活NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)數(shù)目成正比（死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來(lái)溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來(lái)避光，覺(jué)得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000－10000個(gè)接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對(duì)于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)生長(zhǎng)曲線。