細(xì)胞名稱：A7r5     大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞

組織來源：胸大動脈平滑肌

培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS

形       態(tài)：貼壁；成纖維細(xì)胞樣

背       景：培養(yǎng)到穩(wěn)定期后細(xì)胞表現(xiàn)出長高的肌激酶和肌氨酸磷酸激酶活性(CPK)。細(xì)胞分裂終止后合成骨肉型CPK。

A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過三個(gè)階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時(shí)期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。

formazan結(jié)晶的生成量僅與活A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞)數(shù)目成正比（死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000－10000個(gè)接種到96孔板，每孔體積200ul.

2.A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。

4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細(xì)胞)生長曲線。