??????碧云天生產(chǎn)的桿狀病毒穿梭載體bacmid小量抽提試劑盒(Baculovirus Shuttle Vector Bacmid Mini Preparation Kit, 簡稱Bacmid Miniprep Kit)是一種從大腸桿菌DH10Bac中簡單快速抽提高質(zhì)量可完美應(yīng)用于昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染的bacmid的試劑盒。
??????主要特點(diǎn)：簡單快速，不使用劇毒試劑，無須酚氯仿抽提，無須過柱純化，有效解決bacmid分子量大、抽提難度高等系列問題，確保抽提獲得的bacmid可完美用于昆蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
??????當(dāng)目的基因被插入到pFastBac系列載體中構(gòu)建成目的重組質(zhì)粒后，該重組質(zhì)?？捎糜谵D(zhuǎn)化大腸桿菌DH10Bac從而發(fā)生位點(diǎn)特異的轉(zhuǎn)座(site-specific transposition)，藍(lán)白斑篩選和PCR鑒定篩選含有重組bacmid的重組子，再使用本試劑盒進(jìn)行bacmid的小量抽提即可獲得可轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞的bacmid DNA。
??????本試劑盒在抽提bacmid的同時(shí)，也會(huì)抽提輔助質(zhì)粒(helper plasmid)和未重組的pFastBac質(zhì)粒。抽提獲得的bacmid等質(zhì)粒混合物可以直接用于轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞以包裝桿狀病毒，最終用于目的蛋白在昆蟲細(xì)胞中的大量表達(dá)。
??????Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是由Luckow等人于1993年發(fā)展的一種快速而有效產(chǎn)生重組桿狀病毒的方法。該系統(tǒng)主要包括以下兩個(gè)組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因插入后受桿狀病毒特異性啟動(dòng)子(baculovirus-specific promoter)調(diào)控表達(dá)；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質(zhì)粒(helper plasmid，用于表達(dá)轉(zhuǎn)座必須的轉(zhuǎn)座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株。將pfastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化該菌株可發(fā)生pfastBac重組質(zhì)粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發(fā)生轉(zhuǎn)座，從而形成重組的bacmid。
??????利用Bac-to-Bac桿狀病毒感染昆蟲細(xì)胞產(chǎn)生重組蛋白主要包括以下實(shí)驗(yàn)步驟：(1)把目的基因克隆到pFastBac載體產(chǎn)生重組質(zhì)粒；(2)轉(zhuǎn)化pFastBac重組質(zhì)粒到DH10Bac大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)生重組bacmid；(3)利用桿狀病毒穿梭載體bacmid小量抽提試劑盒提取重組bacmid DNA；(4)將重組bacmid DNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入昆蟲細(xì)胞(推薦使用碧云天的C0551 LipoInsect?轉(zhuǎn)染試劑)以產(chǎn)生重組桿狀病毒；(5)擴(kuò)增重組的桿狀病毒并用其感染昆蟲細(xì)胞以大規(guī)模表達(dá)重組目的蛋白。
??????本試劑盒抽提獲得的高質(zhì)量bacmid DNA可以直接用于轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，碧云天生產(chǎn)的LipoInsect?轉(zhuǎn)染試劑(C0551)適用于將pFastBac等桿狀病毒表達(dá)載體制備的bacmid轉(zhuǎn)染到Sf9、Sf21和High Five?等昆蟲細(xì)胞以用于Bac-to-Bac?、BaculoDirect?和InsectSelect?表達(dá)系統(tǒng)的蛋白表達(dá)。LipoInsect?轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率非常高，對昆蟲細(xì)胞Sf9的實(shí)測陽性率可達(dá)98%以上。
??????關(guān)于昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)的蛋白表達(dá)與純化的詳細(xì)介紹，請見如下網(wǎng)頁： http://www.beyotime.com/support/insect cell.htm。
??????一個(gè)包裝的本產(chǎn)品可以進(jìn)行50次bacmid的小量抽提。
包裝清單：

保存條件：
??????室溫保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：?
??????次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加入到溶液I (懸浮液)中，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。加入RNase A后須4℃存放。
??????溫度較低時(shí)，溶液II和溶液III可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，37℃水浴加熱溶解，混勻后使用。
??????溶液II請勿過分劇烈混勻，否則會(huì)產(chǎn)生大量氣泡。
??????溶液II使用完后，請注意蓋緊瓶蓋，以避免被空氣中二氧化碳酸化。
??????本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行，但在4℃進(jìn)行離心也是可以的。
??????溶液II有強(qiáng)堿性，溶液II和溶液III對人體都有刺激性，操作時(shí)請小心，并注意適當(dāng)防護(hù)。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。