細(xì)胞名稱:PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)
組織來源:腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤
培養(yǎng)條件:RPMI-1640 +10% FBS
形 態(tài):貼壁;多角形
背 景:該細(xì)胞系來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤。這些細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)生長因子(NGF)受體。NGF可誘導(dǎo)產(chǎn)生神經(jīng)表型。這些細(xì)胞不合成腎上腺素。
PC-12(高分化)(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化))“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力zui好時(shí)期,稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長期),適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活PC-12(高分化)(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化))數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時(shí)都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。
1.接種:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個(gè)接種到96孔板,每孔體積200ul.
2.PC-12(高分化)(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化))培養(yǎng):同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間)。
3.呈色:培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時(shí),終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對(duì)于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。
4.比色:選擇490nm波長,在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)繪制PC-12(高分化)(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化))生長曲線。
關(guān)鍵字: 細(xì)胞培養(yǎng)_大鼠細(xì)胞系_大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞_
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