CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測的試劑，因其操作簡單快速、高靈敏度且細(xì)胞毒性低等成為替代MTT法檢測細(xì)胞生長密度的方法。該試劑盒利用水溶性四唑鹽-WST?-8在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

優(yōu)勢

• 靈敏度高，數(shù)據(jù)重復(fù)性好
• 操作簡單，安全性高
• 細(xì)胞毒性低，無需放射性同位素
• 單一組分，無需配制

應(yīng)用

細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗

儲存

-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反復(fù)凍融會增加背景值。

注意事項

 

1. 接種時注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種幾個孔就混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基或PBS，而不作為指標(biāo)檢測孔。 
2. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設(shè)法去除。 
3. 用酶標(biāo)儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。 
4. 培養(yǎng)時間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異。一般情況下，白細(xì)胞較難染色，因此需要較長的培養(yǎng)時間或增加細(xì)胞數(shù)量 (～10⁵個細(xì)胞/孔)。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難染色。對于懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)1- 4小時后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目察染色程度或用酶標(biāo)儀測定決定。若染色困難，可將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定。 染色的時間可定為懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)時間。對于貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)時間一般為1-4小時，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據(jù)細(xì)胞種類而定，需要摸索一下條件)。 
5. 若細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化或 pH發(fā)生變化，建議更換新鮮的培養(yǎng)基后再加CCK-8試劑。

引用文獻(xiàn)

• C1q tumor necrosis factor-related protein-3 protects mesenchymal stem cells against hypoxia- and serum deprivation-induced apoptosis through the phosphoinositide 3-kinase/Akt pathway. Int J Mol Med. 2014 Jan; 33(1): 97-104. PMID: 24212403.

• Molecular hydrogen regulates the expression of miR-9,miR-21 and miR-199 in LPS-activated retinal microglia cells. Int J Ophthalmol. 2013 Jun 18; 6(3): 280-5. PMC3693006.